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MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES.

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1 MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. ESTUDIOS IN VITRO. Cañadillas S, Almadén Y, Canalejo R, Rodríguez ME, Quintero A, Pérez J, Rodríguez M. Unidad de Investigación, Servicio de Nefrología. CÓRDOBA

2 INTRODUCCIÓN PLA 2 ARNmVDR PTH Núcleo G Ca 2+ ERK1/2 MAPK AA Ca iCaR CÉLULA PARATIROIDEA

3 HIPÓTESIS PLA 2 ARNmVDR PTH Núcleo G Ca i AA Ca 2+ ERK1/2 MAPK ? CaR

4 OBJETIVO Evaluar si el efecto del AA sobre la secreción de PTH y sobre la expresión génica de VDR es dependiente de la actividad de ERK1/2-MAPK. G CaR PLA 2 Ca i AA ARNmVDR PTH Núcleo ? ERK1/2 MAPK

5 G CaR PLA 2 Ca i AA ARNmVDR PTH Núcleo ? ERK1/2 MAPK DISEÑO EXPERIMENTAL Ca 2+ [Ca 2+ ] = 0.6mM +AA (20μM) AA exógeno Inhibidor de ERK1/2 (PD98059)

6 IRMA RT-PCR GENESCAN DISEÑO EXPERIMENTAL PTH secretada Expresión ARNmVDR

7 [Ca] 0.6mM [Ca] 1.5mM [Ca] 0.6mM +AA +PD [Ca] 0.6mM +AA 1. Participacion de la actividad ERK1/2-MAPK en la inhibicion de la secrecion de PTH por AA. % PTH vs máxima (0.6mM) Ca=0.6mMCa=1.5mM Ca=0.6mM+AA + PD (50μM) Ca=0.6mM+AA (20µM) a p<0.01 vs 0.6mM b p<0.01 vs 0.6mM+AA c p<0.01 vs 1.5mM 1 hora a a b c Sin ERK

8 2. Participacion de la actividad ERK1/2-MAPK en la regulación de la expresión de ARNmVDR por AA. Ca=0.6mMCa=1.5mM Ca=0.6mM+AA + PD (10µM) Ca=0.6mM+AA (20µM) [Ca] 0.6mM [Ca] 1.5mM [Ca] 0.6mM +AA +PD [Ca] 0.6mM +AA %ARNmvdr / β-actina vs Ca=0.6mM a p<0.01 vs 0.6mM b p<0.01 vs 0.6mM+AA c p<0.01 vs 1.5mM 6 horas a a b c Sin ERK

9 PLA 2 ARNmVDR PTH Núcleo G Ca i Ca 2+ PD PTH ERK1/2 MAPK AA

10 3. Efecto del AA sobre la activación (fosforilación) de ERK1/2-MAPK Ca=0.6mMCa=1.5mM Ca=0.6mM +AA CaR Ca 2+ PLA 2 - AA ARNmvdr PTH ERK1/2 MAPK P ? Inmunohistoquímica. Ac. Anti-Fosfo-ERK1/2

11 Ca = 1.5mM Ca = 0.6mM Ca = 0.6mM + AA Células positivas ERK1/2-MAPK activa

12 En glándulas paratiroides de rata, el efecto del AA sobre: 1) Secreción de PTH 2) Síntesis de ARNmVDR es dependiente de la actividad ERK1/2- MAPK. CONCLUSIÓN

13 MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. ESTUDIOS IN VITRO. Cañadillas S, Almadén Y, Canalejo R, Rodríguez ME, Quintero A, Pérez J, Rodríguez M. Unidad de Investigación, Servicio de Nefrología. CÓRDOBA


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