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Microbiología Clínica: Tema 11

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Presentación del tema: "Microbiología Clínica: Tema 11"— Transcripción de la presentación:

1 Microbiología Clínica: Tema 11

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5 Microbiología Clínica: Tema 15 INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

6 Microbiología Clínica: Tema 16 PROCESO DE APRENDIZAJE Conocimientos SABER. Microbiología Medica. Microorganismos productores Hábitos SABER HACER. Microbiología Clínica. Pacientes con síndromes de etiologia microbiana Actitudes SABER SER MEDICO.

7 Microbiología Clínica: Tema 17 MICROBIOLOGÍA CLÍNICA Diagnósticos etiológicos preliminares. Utilización racional de las técnicas diagnósticas. Correcta obtención de muestras. Fundamentos de técnicas y métodos diagnósticos. Evaluación correcta de los resultados.

8 Microbiología Clínica: Tema 18 FASES EN EL DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO Clasificación inicial. Tiene una infección ? Clasificación sindrómica. Que muestras tomar ? Cuando tomarlas ? Como tomarlas ? Diagnósticos simultáneos o sucesivos

9 Microbiología Clínica: Tema 19 FASES DEL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO Fase pre analítica: –Proveer información sobre recogida/transporte y conservación de las muestras. –Interpretación de los resultados. –Utilización de la prueba. Fase analítica: –Producir resultados de calidad. Fase post analítica: –Revisar exactitud del resultado. –Evaluar la relevancia clínica.

10 Microbiología Clínica: Tema 110 RELEVANCIA CLÍNICA Modificación de nuestra actitud con el paciente: –Gravedad del proceso –Otras actividades derivadas Declaración obligatoria Aislamiento del paciente Indicación de profilaxis

11 Microbiología Clínica: Tema 111 MISIONES DE UN SERVICIO DE MICROBIOLOGÍA Información necesaria para tomar una decisión clínica y adopción de medidas preventivas. Normas de obtención de muestras para un correcto diagnóstico microbiológico. Identificación de microorganismos. Estudio de sensibilidad a antimicrobianos. Facilitar recepción de muestras. Envío rápido de resultados. Valoración de las técnicas diagnósticas. Puesta al día de los conocimientos.

12 Microbiología Clínica: Tema 112 NO PIDAS NADA QUE SI ES POSITIVO NO SEPAS QUÉ HACER UTILIZACIÓN DE UNA TÉCNICA DIAGNÓSTICA

13 Microbiología Clínica: Tema 113 UTILIZACIÓN DE UNA TÉCNICA DIAGNÓSTICA Valoración previa de que un paciente presente o no la enfermedad. Planteamiento inicial antes de solicitar una prueba diagnóstica de cual va a ser nuestra actitud y decisión después del resultado de la misma. Conocimiento de la eficacia de una prueba a utilizar.

14 Microbiología Clínica: Tema 114 PARÁMETROS DE UNA TÉCNICA DIAGNÓSTICA Sensibilidad Especificidad V.P.Positivo V.P.Negativo Eficiencia Relevancia clínica Verdadero positivo Verdadero negativo Falso positivo Falso negativo

15 Microbiología Clínica: Tema 115 SENSIBILIDAD (S) S = Verdadero positivo (VP) (VP) + Falso negativo (FN) Verdadero negativo (VN) E = X 100 (VN) + Falso positivo (FP) ESPECIFICIDAD (E)

16 Microbiología Clínica: Tema 116 EFICIENCIA X 100 VP + VN Total

17 Microbiología Clínica: Tema 117 VALOR PREDICTIVO POSITIVO (VPP) VPP = (VP) (VP) + (FP) (VN) VPN = X 100 (VN) + (FN) VALOR PREDICTIVO NEGATIVO (VPN)

18 Microbiología Clínica: Tema 118 ERRORES DIAGNÓSTICOS Falso Positivo: Diagnóstico microbiológico de un paciente que no padece la enfermedad infecciosa. I.T.U. Falso Negativo: Descartar una patología infecciosa en un paciente infectado. Meningitis meningocócica.

19 Microbiología Clínica: Tema 119 VALOR PREDICTIVO DE UNA PRUEBA CON UN 95% DE S. Y UN 95% DE E. VARIACIONES EN FUNCIÓN DE LA PREVALENCIA DE LA ENFERMEDAD Prev. Enfermedad (%)Valor Predictivo (%)

20 Microbiología Clínica: Tema 120 NORMAS GENERALES DE TOMA DE MUESTRAS CLÍNICAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE LAS EE.II. La muestra debe ser representativa del cuadro clínico. Debe obtenerse antes de la instauración del tratamiento antimicrobiano. En determinados procesos infecciosos (p. ej. septicemia) el momento de la obtención puede ser importante. Debe transportarse rápida y adecuadamente al laboratorio. Debe rotularse correctamente y venir acompañada de una orientación o juicio clínico que permita realizar las técnicas adecuadas al microorganismo sospechado.

21 Microbiología Clínica: Tema 121 MUESTRAS PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO: TIPOS Muestras de obtención directa de localizaciones estériles. Alta rentabilidad. Muestras de obtención indirecta de localizaciones estériles. Rentabilidad dependiente de la flora saprofita. Muestras obtenidas de localizaciones con flora microbiana. Muestras para el diagnóstico virológico. Alta rentabilidad, si no es flora viral habitual.

22 Microbiología Clínica: Tema 122 PRINCIPALES MUESTRAS CLÍNICAS PARA AISLAMIENTO DE VIRUS Cuadro clínicoExudado faríngeo LCROrinaHecesVesículasOtros Meningitis y Encefalitis V. de la parotiditis Enterovirus Herpes simple Respiratorios: Gripe y V. parainfluenzae Adenovirus (++++) (+++) (+/-)/(++++) (++++) (++) (+/-) (-) (+) (-) (+++) (-) (+++) (-) (+) (-) Biopsia (++++)

23 Microbiología Clínica: Tema 123 MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Métodos directos: –Visualización del microorganismo. –Aislamiento del microorganismo. –Detección de antígenos. –Detección de metabolitos, componentes y ácidos nucleicos. Métodos indirectos: –Detección de anticuerpos: Diag. Serológico. –Detección Respuesta Inmune Celular.

24 Microbiología Clínica: Tema 124 PRINCIPALES TÉCNICAS MICROSCÓPICAS USADAS PARA LA VISUALIZACIÓN DE MICROORGANISMOS EN MUESTRAS CLÍNICAS TécnicaUtilidad Microscopía óptica: Fresco Microscopía óptica: Tinción Microscopía campo oscuro Microscopía contraste de fases Microscopía luz ultravioleta Microscopía electrónica Hongos, parásitos y virus (efecto citopático) Bacterias, hongos y parásitos. Treponemas (chancro sifilítico) Hongos y parásitos (poca utilidad diagnóstica) Inmunofluorescencia(bacterias, hongos y parásitos. Virus (poca utilidad diagnóstica)

25 Microbiología Clínica: Tema 125 VISUALIZACIÓN DEL MICROORGANISMO Microscopía: diferentes tipos Examen en fresco Tinciones: –Tinción de Gram –Tinción de Ziehl-Neelsen

26 Microbiología Clínica: Tema 126 TINCIÓN DE GRAM: APLICACIONES LCR y otros fluidos estériles Esputo Exudado uretral Exudado vaginal Exudados inflamatorios Orina

27 Microbiología Clínica: Tema 127 INFORMACIÓN QUE APORTA UNA TINCIÓN DE GRAM EN MUESTRAS CLÍNICAS (EXUDADOS INFLAMATORIOS Y FLUIDOS ESTÉRILES) Permite evaluar la calidad de la muestra. Presencia de: –Células inflamatorias muestra adecuada –Células epiteliales posible contaminación Permite visualizar la morfología, su disposición y localización intra o extracelular de las bacerias Permite diferenciar bacterias: Gram + y Gram – Permite detectar la presencia de flora contaminante Permite cuantificar el número de bacterias.

28 Microbiología Clínica: Tema 128 AISLAMIENTO DEL MICRORGANISMO Cultivo en medios artificiales: –Nutritivos –Selectivos –Diferenciales Cultivos celulares: –C. de órgano C. primarios –C. Secundarios Línea celular Inoculación animal

29 Microbiología Clínica: Tema 129 CARACTERÍSTICAS UTILIZADAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS Crecimiento en distintos medios de cultivo Características bioquímicas Producción de toxinas Estructura antigénica Estructura genómica

30 Microbiología Clínica: Tema 130 DETECCIÓN DIRECTA DE ANTÍGENOS MEDIANTE TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN Antígenos bacterianos –H. influenzae –S. pneumoniae –N. meningitidis Antígenos fúngicos –C. neoformans Antígenos víricos –Rotavirus –Adenovirus

31 Microbiología Clínica: Tema 131 DETECCIÓN DIRECTA DE ANTÍGENOS MEDIANTE TÉCNICAS DE ELISA Antígenos bacterianos –S. pyogenes –L. pneumophila –C. trachomatis –C. difficile (toxina) Antígenos fúngicos –C. neoformans –A. fumigatus Antígenos víricos –Adenovirus –Herpesvirus –V. respiratorio sincitial –Rotavirus Antígenos parasitarios –G. lamblia –C. parvum –E. histolytica

32 Microbiología Clínica: Tema 132 VENTAJAS DE LAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN Sensibilidad extrema (detectan hasta 1-10 microorganismos) Alta especificidad (diseño de cebadores en función de secuencias específicas del microorganismo) Rapidez de realización (máximo 24 horas) Detección de microorganismos viables y no viables Automatizables

33 Microbiología Clínica: Tema 133 INCONVENIENTES DE LAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN Posibles falsos positivos Acondicionamiento especial del laboratorio Alto nivel de entrenamiento del personal Elevado coste inicial

34 Microbiología Clínica: Tema 134 DIAGNÓSTICO MEDIANTE BIOCHIPS-MICROARRAYS Se fundamenta en una técnica de afinidad utilizando sondas de ácidos nucleicos para hibridación soportadas en un chip. Es una aplicación de la Bioinformática. Un microarray es una herramienta para analizar la expresión genética que consiste en una pequeña membrana o un portaobjetos de vidrio que contienen muestras de muchos genes organizados según un petrón determinado.

35 Microbiología Clínica: Tema 135

36 Microbiología Clínica: Tema 136

37 Microbiología Clínica: Tema 137

38 Microbiología Clínica: Tema 138 Experimento con un Microarray de ADN

39 Microbiología Clínica: Tema 139 VENTAJAS DE LA DETECCIÓN RÁPIDA DE LA RESISTENCIA MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES Reducir el tiempo requerido para instauración tratamiento definitivo Evitar tratamientos incorrectos Detección de portadores infectados con microorganismos resistentes Reducción de costes y tiempo de estancia hospitalaria

40 Microbiología Clínica: Tema 140 INCONVENIENTES DE LAS TÉCNICAS MOLECULARES DEN LA DETECCIÓN DE RESISTENCIAS Desconocimiento de la secuencia del gen/es implicados Casos con múltiples genes implicados Diferente grado de expresión de los genes en condiciones ambientales diferentes Los microorganismos de la flora saprofita poseen también genes de resistencia

41 Microbiología Clínica: Tema 141 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO: UTILIZACIÓN Agente causal: –No cultivable –Peligroso su cultivo –Crecimiento lento Cambiar el diagnóstico o el tratamiento Comprender el proceso de la enfermedad Estado inmunológico del paciente. Datos para Epidemiología.

42 Microbiología Clínica: Tema 142 DETERMINACIONES SEROLÓGICAS Inmunofluorescencia –Directa –Indirecta Radioinmunoanálisis Enzimainmunoanálisis –ELISA tipo1 –ELISA tipo2 –ELISA tipo3 (captura)

43 Microbiología Clínica: Tema 143 Precipitación –Medio sólido –Medio líquido Aglutinación –Directa –Hemaglutinación –Látex Fijación de complemento DETERMINACIONES SEROLÓGICAS

44 Interpretación de la Serologia Parejas de sueros - Seroconversion. Negativo a Positivo - Serorefuerzo. Titulo.inicial x 4 o más. Infecciones cronicas. -Deteccion IgM. -Acs frente a diversos antigenos. Periodo Ventana

45 Diag. Serológico. Infecciones 1)Valoración de IgG E IgM específica. 2)Valoración de IgG. Avidez. 3)Diagnóstico de Primoinfección.

46 Diag. Serológico. Objetivos Diag. Etiológico por la Respuesta Inmune Humoral. Determinar Protección Frente a Infecciones. Determinar Prevalencia de Infecciones.

47 Microbiología Clínica: Tema 147 DETECCIÓN DE RESPUESTA INMUNE CELULAR Pruebas cutáneas Activación linfocitaria Inhibición de los macrófagos Linfotoxicidad. Actualmente NO se usan


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