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CULTIVO CELULAR Proliferación de Linfocitos con Concanavalina A 1065. Inmunología Aplicada Dra. Ana Esther Aguilar Cárdenas
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Obtención de células esplénicas. Ratón Perfundir con 5 mL de RPMIss Suspensión celular en tubo de 15 mL Centrifugar 1500 rpm, 10’ Decantar sobrenadante Resuspender en 5 mL RPMIss Centrifugar 1500 rpm, 10’ Decantar sobrenadante Resuspender en 5 mL RPMIs Extracción del bazo
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Conteo de Linfocitos Dilución 1:20 10 L suspensión + 90 L azul tripano Llenar cámara de New Bauer Realizar conteo de linfocitos (40x) Ajustar suspensión con RPMIs (10 6 cel/mL)
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Muestreo en Placas Llenar 3 pozos con: 500 L de la suspensión de linfocitos ajustada + 500 L de Concanavalina A 10 g/mL Llenar 1 pozo con: 500 L de la suspensión de linfocitos ajustada + 500 L de RPMI suplementado. Incubar la placa a 37°C durante 24 horas. Realizar las observaciones
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