PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS

Presentación del tema: "PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS"— Transcripción de la presentación:

1 PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS
PRÁCTICA 9 PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS

2 Precipitación 20 µL plasma + 56 µl EtOH Tapar e invertir 2 veces
Incubar en hielo x 30 min Centrifugar a rpm x 5min P40% + 333 µl EtOH 500 µL plasma P70% µl EtOH

3 Mantener eppendorfs con sobrenadantes en Hielo
Luego de centrifugar… S10% S10% P10% Sacar sobrenadante 400 µl de sobrenadante *Conservar pellet S40% P40% S40% Sacar sobrenadante 400 µl de sobrenadante Mantener eppendorfs con sobrenadantes en Hielo *Conservar pellet P70% S70% Sacar sobrenadante 400 µl de sobrenadante S70% *Conservar pellet

4 Mantener eppendorfs con precipitados en Hielo
Pellet Resuspender el pellet… P10% + 200 µl Buffer Tris-HCl 0.05M Vortex 2min P40% Mantener eppendorfs con precipitados en Hielo + 200 µl Buffer Tris-HCl 0.05M Vortex 2min P70% + 200 µl Buffer Tris-HCl 0.05M Vortex 2min

5 Cuantificación de Proteínas
Reactivo B St M P10% P40% P70% S10% S40% S70% Estándar (µL) --- 10 Muestras (µL) Biuret (µL) 1000 Incubar por 10 minutos a 37°C Leer la absorbancia de los tubos a 540nm

6 Determinación de Albúmina
Reactivo B St M P10% P40% P70% S10% S40% S70% Estándar (µL) --- 10 Muestras (µL) Albúmina (µL) 1000 Incubar por 3 minutos a temperatura ambiente Leer la absorbancia de los tubos a 620nm.