TINCIONES BACTERIANAS

Presentación del tema: "TINCIONES BACTERIANAS"— Transcripción de la presentación:

1 TINCIONES BACTERIANAS
¡Por favor que quede bien gramnegativa señor Gram! Te recomiendo safranina para darle un buen tono

2 Porque se colorean las bacterias?
Visualizarlas mejor Aumentando el contraste entre la bacteria y el medio que las rodea Detalles morfológicos Aumentan un poco su tamaño

3 Que es un colorante? Compuestos orgánicos (la mayoría)
Poseen afinidad específica por los materiales celulares. Según su naturaleza se unen a diferentes componentes celulares Cationicos (+) Comp (-): Ac nuc y polisacáridos ácidos. Aniónicos (-) comp (+): proteínas Azul de metileno Cristal violeta safranina Eosina Fucsina ácida Rojo congo

4 CLASIFICACION DE LAS TINCIONES
Simples: 1 solo colorante Todo se tiñe igual Ejemplos: Tinta china (-), Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol. Diferenciales: Más de 1 colorante Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes. Ejemplos: Gram y Ziehl-Neelsen

5 PRECOLORACION Fijación Mordiente Coagulación del plasma
Calor Sustancias qcas (formaldehido, ácidos y alcoholes) Mordiente Sustancias que se combinan con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora después de esto el colorante podrá fijarse al constituyente. Ejemplo: Acido tánico, lugol.

6 COLORACION DE GRAM I Hans Christian Gram 1884
Descubrimiento accidental Biopsia de tejido pulmonar Algunas bacterias retenían el colorante después del lavado y otras no Grampositivas Gramnegativas

7 ¿QUE SE NECESITA? I Colorantes Cristal Violeta Lugol Alcohol-Cetona.
Safranina.  Otros                  Charola de tinción. Asa bacteriológica. Frasco lavador. Lámina portaobjetos  Muestra bacteriana Sólida (agar) Líquida (caldo) Especímen clínico.  

8 ¿COMO SE HACE? I 1. Extensión

9 I ¿COMO SE HACE? 2. Coloración 2.1 Violeta de Genciana 1 min

10 I ¿COMO SE HACE? 2. Coloración 2.2 Lugol de Gram 1 min

11 ¿COMO SE HACE? I 2. Coloración (Etanol al 75 % y acetona al 95 %)
2.3 Alcohol Acetona (Decoloración) (Etanol al 75 % y acetona al 95 %) seg

12 I ¿COMO SE HACE? 2. Coloración 2.4 Safranina 30 seg

13 I ¿COMO SE HACE? 3. Secado

14 I ¿COMO SE HACE? 4. Observación 4.1 Aplicar aceite de inmersión

15 ¿COMO SE HACE? I 4. Observación 4.2 M.O con objetivo de 100x
Gramnegativas Grampositivas

16 II-P1 COLORACION DE GRAM Violeta Claro Safranina Violeta

17 COLORACION DE ZIELH NEELSEN
Franz Ziehl (bacteriólogo) y Friedrich Neelsen (patólogo). Tinción diferencial Fundamento: Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) de cadena larga (50 a 90 átomos de C) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido

18 VARIANTES Clásica Variante de Kinyoun En caliente Para Micobacterias
En frío Para Actinomyces y Nocardia

19 TECNICA Realizar frotis Fijar Fucsina-fenicada 5 minutos Lavar
Emisión de vapores (no hierva) Lavar Decolorar con alcohol-ácido (2 min o hasta decolración total) Aplicar azul de metileno (1 minuto).

20 CONSULTA Tinción negativa Tinción para esporas Tinción de Loeffler
Rojo Congo