La descarga está en progreso. Por favor, espere

La descarga está en progreso. Por favor, espere

1 Resonancia magnética nuclear 1.¿Qué es y para qué sirve? Instrumentación 2.Parámetros de un espectro sencillo de RMN Intensidad (área bajo la curva)

Presentaciones similares


Presentación del tema: "1 Resonancia magnética nuclear 1.¿Qué es y para qué sirve? Instrumentación 2.Parámetros de un espectro sencillo de RMN Intensidad (área bajo la curva)"— Transcripción de la presentación:

1 1 Resonancia magnética nuclear 1.¿Qué es y para qué sirve? Instrumentación 2.Parámetros de un espectro sencillo de RMN Intensidad (área bajo la curva) Desplazamiento químico ( ). Grupos funcionales en 1 H RMN Desdoblamiento de señales Tiempos de relajación Espectros bidimensionales 3.Aplicaciones de RMN en bioquímica Cinética y vías metabólicas Unión de ligandos a macromoléculas Modificaciones estructurales de proteínas Determinación de estructuras de macromoléculas.

2 2 sin campocon campo Los núcleos atómicos se comportan como pequeños imanes

3 3 campo magnético En presencia de un campo magnético se separan dos estados energéticos

4 4 Propiedades de algunos núcleos atómicos Isótopo Abundancia natural (%) número cuántico de spin (I) Momento magnético (μ) Frecuencia de resonancia a 7 T (MHz) Sensibilidad relativa 1H1H / H2H C C1.11/ N N0.371/ O º / F1001/ Si P1001/

5 5 Equipo básico de RMN transmisor de radiofrecuencia Control y registrador receptor de radiofrecuencia Polo del imán Polo del imán Bobinas de barrido Bobinas de barrido Generador de barrido Tubo de muestra

6 6 Parámetros de un espectro de RMN 1) Intensidad (área bajo la curva). Es proporcional al número de protones que dan origen a la señal

7 7 Parámetros de un espectro de RMN 2) Desplazamiento químico ( ) Es producto del campo magnético inducido por los electrones vecinos al núcleo

8 8 Parámetros de un espectro de RMN 2) Desplazamiento químico ( ) desprotegido campo bajo protegido campo alto

9 9 Parámetros de un espectro de RMN 2) Desplazamiento químico ( )

10 10 Parámetros de un espectro de RMN 2) Desplazamiento químico ( ) Observaciones: Los grupos electronegativos desprotegen a los núcleos y tienden a desplazar las señales a campo bajo (a mayores valores en ppm) Los protones unidos a O y N tienen desplazamientos químicos muy variables que son sensibles a la concentración (formación de puentes de hidrógeno) a la temperatura y al disolvente (fenómenos de intercambio químico). Los sistemas desprotegen mucho a los protones que tienen unidos y tienden a desplazar las señales a campo bajo (a mayores valores en ppm)

11 11 Parámetros de un espectro de RMN 3) Desdoblamiento de señales (acoplamiento spin-spin) núm. de vecinos 123

12 12 Parámetros de un espectro de RMN 3) Desdoblamiento de señales (acoplamiento spin-spin) Sin hidrógenos acoplados Un hidrógeno acoplado Dos hidrógenos acoplados Tres hidrógenos acoplados singulete doblete triplete cuarteto doblete triplete cuarteto Triángulo de Pascal

13 13 Parámetros de un espectro de RMN 4) Tiempos de relajación El término relajación describe varios procesos por los cuales la magnetización de un estado fuera del equilibrio regresa a la distribución de equilibrio. Es decir, la relajación describe qué tan rápido los spines nucleares olvidan la dirección en que estaban orientados. Las velocidades de esta relajación de spines se puede medir y tiene aplicación en espectroscopía y en obtención de imágenes.

14 14 Interpretación de espectros simples de 1 H RMN Qué se puede obtener del espectro: 1- ¿Cuántos tipos de H hay? – Indicado por cuántos grupos de señales hay en el espectro 2.- ¿Qué tipos de H ? – Indicados por los desplazamientos químicos de cada grupo 3.- ¿Cuántos H hay de cada tipo? – Indicados por la integración de la señal de cada grupo 4.- ¿Cuál es la conectividad? – A través de los patrones de acoplamiento sabemos qué grupo es vecino de qué grupo.

15 15 Algunos ejemplos de espectros e interpretación

16 16

17 17 Algunos ejemplos de espectros e interpretación

18 18 Molécula con un alqueno terminal Molécula con un patrón de desdoblamiento de 9 líneas Nueve líneas, las de los extremos son demasiado pequeñas y no se ven

19 19 Un poco más complicado: 2D C 4 H 8 O: COSY CH 3 – CH 2 – CH 2 – OH CH 3 CH 2 OH

20 20 Robinson, H. and A. H. Wang (1996). Nucleic Acids Res 24(4): Usan 1 H RMN para estudiar las transiciones estructurales en el polinucleótido dúplex A2G15C15T2 en presencia de la sonda catiónicas Co(NH 3 ) Las figuras muestran dos secciones del espectro donde se ven algunos de los protones de las bases en presencia de Co(NH 3 ) 6 3+ en diferentes relaciones de concentración respecto al ADN. Unión de ligando a ADN

21 21 19 F RMN de una proteína intestinal de unión a ácidos grasos. La proteína se preparó con ocho residuos de F-fenilalanina, los números de residuo son los que aparecen arriba de los picos en los espectros. El espectro de arriba (holo) corresponde a la proteína unida a una molécula de ácido oleico, mientras que el espectro de abajo (apo) es el de la proteína sin ligandos. Unión de ligando a proteína

22 22 Modificación de proteínas (A)Lisozima intercambiada con deuterio (B)Lisozima sin intercambio ( 1 H) (C)Lisozima precipitada en D 2 O con un desnaturalizante suave Chang, S.T. et al (1998) Biotech. and Bioeng. 59:144.

23 23 Modificación de proteínas (A)Lisozima intercambiada con deuterio (B)Lisozima sin intercambio ( 1 H) (C)Lisozima precipitada en D 2 O con un desnaturalizante suave Chang, S.T. et al (1998) Biotech. and Bioeng. 59:144.

24 24 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos y de amida ( ppm), y de protones de carbono alfa y metínicos (< 5.8 ppm). Int. J. Biol Macromol (2001) 29; Desnaturalización de proteína

25 25 1 H RMN de insulina. Región de los protones de residuos aromáticos con diferentes concentraciones de ion cinc agregado. Los números indican las veces en exceso que se encuentra el Zn 2+. Unión de ligando a proteína

26 26 Zhuang, Z, et al (2002) Biochemistry, 41, NMR de 4-Hidroxibenzoil- CoA tioesterasa Unión de ligando a proteína

27 27 1 H RMN de la proteína nucleocápside HIV-1 (Bombarda, E. et al (2001) J Mol Biol 310, 659). Los diferentes puntos representan los protones del C de la Cys36 (), Cys39 ( y ) y Cys49 () Propiedades de aminoácidos en proteínas

28 28 31 P RMN ( J. Biol. Chem. (1996) 45; ). Mezcla de reacción que contiene inicialmente ATP, GMP y guanilato quinasa (GK) (espectros a, b, c, d) o bien ADP, GDP y GK (espectros e, f, g, h) y cuyo cambio se observa en el tiempo. Cinética enzimática


Descargar ppt "1 Resonancia magnética nuclear 1.¿Qué es y para qué sirve? Instrumentación 2.Parámetros de un espectro sencillo de RMN Intensidad (área bajo la curva)"

Presentaciones similares


Anuncios Google