EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON UN ANTIOXIDANTE A BASE DE DHA, Zn, Se Y Co Q10 EN LOS PARÁMETROS ESPERMÁTICOS, NIVELES DE ESTRÉS OXIDATIVO Y FRAGMENACIÓN.

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2 EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON UN ANTIOXIDANTE A BASE DE DHA, Zn, Se Y Co Q10 EN LOS PARÁMETROS ESPERMÁTICOS, NIVELES DE ESTRÉS OXIDATIVO Y FRAGMENACIÓN DE ADN EN VARONES NORMOZOOSPÉRMICOS. Rocío Núñez Calonge, Susana Cortés Gallego, Leonor Ortega, Iván Orozco, Pedro Caballero Peregrin Clínica TAMBRE, Madrid

3 INTRODUCCIÓN

4 INTRODUCCIÓN

5 INTRODUCCIÓN Antioxidants for male subfertility.
Showell MG1, Mackenzie-Proctor R, Brown J, Yazdani A, Stankiewicz MT, Hart RJ COCHRANE DATA BASE SYST REW, DEC There is low quality evidence from only four small randomised controlled trials suggesting that antioxidant supplementation in subfertile males may improve live birth rates for couples attending fertility clinics. Low quality evidence suggests that clinical pregnancy rates may increase

6 OBJETIVOS El objetivo principal de este estudio es conocer el efecto de la administración de un antioxidante en los niveles de estrés oxidativo e índice de fragmentación de ADN en varones normozoospérmicos. El objetivo secundario es conocer si existe una relación entre el estrés oxidativo y el daño del ADN en muestras de semen de varones normozoospérmicos.

7 MATERIAL Y MÉTODOS Estudio prospectivo, randomizado.
Antioxidante con: DHA, Se, Zn y Co Q10 durante 3 meses. Grupo control: 7 donantes de semen Grupo experimental: 8 donantes de semen Determinación de: volumen, concentración espermática, movilidad, nivel de estrés oxidativo y fragmentación de ADN.

8 MATERIAL Y MÉTODOS

9 MATERIAL Y MÉTODOS Selenio, interviene en esteroidogénesis testicular, desarrollo testicular, consumo de oxígeno por parte de los espermatozoides El Zinc, interviene en esteroidogénesis testicular, consumo de oxígeno por parte de los espermatozoides, grado de condensación de la cromatina nuclear espermática, reacción acrosómica y conversión de testosterona en 5-alfa-dihidrotestosterona La Coenzima Q10 es un agente productor de energía. Recicla la vitamina E, impidiendo su actividad prooxidante .. Se ha demostrado que la CoQ10 inhibe la formación de peróxido de hidrógeno en el plasma seminal de varones infértiles, y su nivel está directamente relacionado con la movilidad espermática. DHA (ácido docosahexaenoico) el DHA, al igual que las vitaminas y minerales, no puede ser sintetizado por el organismo y únicamente puede obtenerse a través de la dieta, principalmente con la ingesta de pescado azul y algas marinas

10 Determinación del estrés oxidativo
MATERIAL Y MÉTODOS Determinación del estrés oxidativo Test OxiSperm: determina una concentración elevada de anión superóxido (O2-) en el eyaculado. El test utiliza el GR con capacidad de virar su color original al reaccionar con el anión superóxido, responsable del estrés oxidativo que puede estar presente en el semen humano. De acuerdo a la concentración del anión superóxido, se forma un precipitado de color variable. La intensidad de color se correlación con el nivel de estrés oxidativo: N1=No detectable, N2=Nivel bajo, N3=Nivel Medio, N4=Nivel Alto. Se considera N1 y N2 como oxidación normal y a N3 como oxidación aumentada. El test está basado en el ensayo de nitro azul de tetrazolio (NAT) en la forma de un gel reactivo (GR). El test NAT está basado en la capacidad de la sal de tetrazolio en agua soluble convertirse por acción del anión superóxido (O2-) en cristales azules en agua insoluble, denominado formazan .Según las concentraciones de anión superóxido (estrés oxidativo) en la muestra seminal, el formazan producirá un color característico en el GR. Cada muestra se clasifica en uno de los cuatro niveles (N1,N2, N3 o N4) en función del nivel de estrés oxidativo según el Test del estrés oxidativo NBT-t (Nitro Blue Tetrazolio, para la detección del anión superóxido).

11 MATERIAL Y MÉTODOS Análisis de la fragmentación de ADN

12 MATERIAL Y MÉTODOS

13 MATERIAL Y MÉTODOS Tanto en el grupo control como en el experimental se realizaron determinaciones basales. Posteriormente, determinaciones a los 30, 60 y 90 días del tratamiento. En todos los casos se realizaron tras 3 días de abstinencia sexual.

14 MATERIAL Y MÉTODOS Los donantes incluidos en el estudio no tomaban ningún tipo de medicación o suplemento alimenticio. Las comparaciones entre grupos se han realizado con T de Student y las comparaciones de la evolución temporal con ANOVA, salvo en el caso del EO en el que ambas se han hecho con chi2.

15 RESULTADOS: Condiciones basales
MEDICACIÓN I.F. E.O. VOL. CONC PROG SI 11% 1 1,5 91 58 7,67% 3 4 95 56 2,6 66 61 10,67% 132 59 12% 25 62 17,33 41 52 2,5 85 57 48,33% 6 48 45 NO 20,33% 2 60 18,33% 4,5 80 50 41,67% 3,5 33 54 110 42 28,33% 2,3 120 64 8,33% 90

16 RESULTADOS: volumen

17 RESULTADOS: concentración

18 RESULTADOS: movilidad progresiva

19 RESULTADOS: estrés oxidativo

20 RESULTADOS: índice fragmentación

21 CONCLUSIONES El empleo de antioxidantes orales que contengan DHA, Co Q10, Se y Zn, en varones , puede mejorar el índice de fragmentación de ADN, que es visible a partir de los 30 días de tratamiento. Después de dos meses de tratamiento no se observa mejora en el índice de fragmentación. No hemos encontrado una correlación significativa entre el nivel de estrés oxidativo y el índice de fragmentación del ADN espermático.

22 Aunque los controles de calidad externos son procesos aún minoritarios dentro de los sistemas de la calidad, resultan imprescindibles para fomentar la normalización de los resultados dentro de los laboratorios de reproducción asistida. En este sentido todos los esfuerzos que los centros dirijan hacia su implantación y mantenimiento repercutirán directamente en una estandarización de los resultados del análisis de semen. Es imprescindible, en primer lugar, implantar controles de calidad internos que mejoren la PRECISIÓN de los resultados de nuestro equipo, a continuación, el control de calidad externo a través de la comparación de esos resultados con diferentes laboratorios nos indicará cual es la EXACTITUD de los mismos. Debemos hacer hincapié en que el punto más importante del proceso es el del ANÁLISIS DE LOS DATOS una vez procesados por parte del centro evaluador. A menudo los resultados se quedan en los responsables del laboratorio y en el peor de los casos puede que incluso en el cajón. Es importante que exista un feedback con los resultados obtenidos tras el control externo de calidad ¿Qué puede hacer el laboratorio para mejorar? ¿Necesita mas entrenamiento el equipo? ¿Hay que modificar los procedimientos? ¿Es necesario mejorar el equipamiento? Trabajar con estos datos y asimilar los cambios a los que dan lugar es el mejor modo de mejorar nuestros contajes y acercarnos al estándar tan necesario en el diagnóstico del factor masculino.