RESULTADOS Y DISCUSION

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1 RESULTADOS Y DISCUSION
Listeriosis invasiva en Uruguay: origen y subtipificación de los aislamientos de Listeria monocytogenes María Inés Mota, Valeria Braga, Victoria Vico, Leticia Caiata, Felipe Schelotto, Gabriela Algorta, Gustavo Varela. Departamento de Bacteriología y Virología, Facultad de Medicina, UdelaR. INTRODUCCIÓN METODOLOGÍA. Listeria monocytogenes (LM) es una bacteria ubicua en la naturaleza; desde los años 80 se reconoce como un importante patógeno de transmisión alimentaria. LM es esencialmente un patógeno oportunista que ocasiona enfermedad severa (meningitis, meningoencefalitis y bacteriemia) en adultos mayores o inmunocomprometidos; además puede ocasionar complicaciones en el embarazo con consecuencias graves para el feto o recién nacido. La listeriosis humana puede presentarse como casos esporádicos o en forma de brotes. Estos últimos son difíciles de reconocer por las características epidemiológicas y clínicas de la enfermedad que hacen que los sistemas tradicionales de vigilancia no sean capaces de detectar casos asociados. Los objetivos de este trabajo fueron describir el origen de los aislamientos humanos de LM que fueron enviados al laboratorio del Depto. de Bacteriología y Virología (Facultad de Medicina) en el periodo y por otro lado realizar la subtipificación y comparación genética de dichos aislamientos. Los aislamientos clínicos de LM recibidos se confirmaron por pruebas bioquímicas estándar y PCR para el gen específico de especie inlA (Liu et al). La serotipificación se realizó mediante la combinación de dos técnicas: aglutinación con antisueros comerciales (BBL-Difco) para los antígenos somáticos 1 y 4 de LM de acuerdo con las instrucciones del fabricante y PCR múltiple de acuerdo al método descrito por Doumith et al. La electroforesis en campo pulsado (PFGE) se realizó según protocolo estándar internacional de PulseNet (2013) empleando las enzimas de restricción AscI y ApaI. Los dendrogramas de similitud fueron generados en software Bionumerics 6.1 (Applied-Maths) usando UPGMA y el coeficiente de Dice con una tolerancia y optimización de 2 %. RESULTADOS Y DISCUSION Desde el año 2010 hasta setiembre de 2016 recibimos aislamientos de LM recuperados de 38 casos de listeriosis invasiva (promedio 6 aislamientos/año). Los mismos provenían de laboratorios de 15 instituciones médicas diferentes (11 de Montevideo y 4 del interior del país). Once casos (29%) estuvieron relacionados al embarazo lo que concuerda con lo descrito en la literatura, correspondiendo la mayoría de los casos a adultos con factores de riesgo. De los 27 casos no relacionados a embarazo obtuvimos el dato de la edad en 20 de ellos siendo el rango de 9 a 83 años con una mediana de 67 años (8 pacientes menores de 60 años). El origen de los aislamientos fue como era de esperar principalmente de hemocultivos (17) y líquido cefalorraquídeo (14); el resto se aislaron membranas ovulares (2), líquido articular (1), punción vertebral (1), líquido ascitis (1), urocultivo (1), sin dato (1). La identificación de la especie L. monocytogenes fue confirmada en todos los casos. En cuanto a los serotipos la distribución fue la siguiente: 1/2b (19), 4b (16) y 1/2a (3). Más del 95% de los aislamientos humanos corresponden a los serotipos 1/2a, 1/2b, y 4b en el mundo con los cual coincidimos; sin embargo predomina levemente el serotipo 1/2b y no el 4b como en la mayoría de los lugares. C1 C2 C3 C4 C5 C6 Fig. 1. Dendrograma de los perfiles de PFGE con AscI. Se marcan los clusters de aislamientos con perfiles indistinguibles. Se incluye serotipo y fecha de aislamiento. Se obtuvieron 23 perfiles diferentes de PFGE con enzima AscI y 6 clusters (2 - 6 aislamientos) (ver figura 1). Los aislamientos de los 6 clusters presentan además un perfil indistinguible o con una banda de diferencia con la enzima ApaI lo cual podría indicar un origen común de los mismos. Se necesita de una investigación epidemiológica y el análisis de los alimentos para poder determinarlo. El cluster 5 pertenece a un brote de listeriosis neonatal (Mota y col). CONCLUSIONES La listeriosis invasiva ocurre en nuestro país con una incidencia desconocida ya que no es de denuncia obligatoria, excepto los casos de meningitis. Si bien en el mundo se describen cientos de brotes por L. monocytogenes de origen alimentario, en nuestro país no se ha reportado ninguno; sin embargo en 2016 ha ocurrido un aumento importante en el número de casos. Los brotes de listeriosis son difíciles de reconocer por el largo periodo de incubación de la enfermedad y por afectar un numero reducido de personas además de contaminar alimentos que pueden estar almacenados por largos periodos de tiempo y ser ampliamente distribuidos. Por ello la investigación de los mismos involucra un sistema de vigilancia epidemiológica actuando en coordinación con un laboratorio de subtipificación de los aislamientos de LM y con el monitoreo permanente de los alimentos por parte de las autoridades municipales y nacionales competentes. REFERENCIAS D. Liu et al. A multiplex PCR for species- and virulence-specific determination of Listeria monocytogenes. J Microbiol Methods 2007; 71: 133–140.  M. Doumith et al. Differentiation of the major Listeria monocytogenes serovars by multiplex PCR. J Clin Microbiol 2004; 42: Mota MI et al. Brote intrahospitalario de listeriosis neonatal. En: Libro de resúmenes: XXII Congreso Latinoamericano de Patología Clínica / Medicina de Laboratorio (ALAPAC/ML). Punta del Este; p