Cristina Pesquera Alegría

Presentación del tema: "Cristina Pesquera Alegría"— Transcripción de la presentación:

1 Cristina Pesquera Alegría
Transmisión de enfermedades a través de garrapatas: Estudio de garrapatas de tapir andino, ganado bovino y vegetación Cristina Pesquera Alegría

2 Garrapata: ácaro hematófago ectoparásito de vertebrados
Familia Nuttalliellidae Familia Argasidae Familia Ixodidae Amblyomma Dermacentor Haemaphysalis Ixodes Rhipicephalus ECUADOR

3 Morfología

4 Biología

5 Efectos de la picadura de garrapata:
Pérdida de sangre Traumatismo local con posible infección Hipersensibilidad Saliva Parálisis Neurotoxinas Transmisión de agentes infecciosos Bacterias Virus Protozoos Cestodos Nematodos

6 Elevado potencial de transmisión:
Alimentación hematófaga Tiempo de alimentación Intercambio de fluidos Varios hospedadores Transmisión transestadial Transmisión transovárica Elevado potencial de dispersión Alta capacidad reproductora y de supervivencia

7 Prevención Evitar zonas infestadas Ropa protectora
Repelentes (DEET: Permetrina, picardina) Control de garrapatas Control físico y mecánico Control biológico Control químico Educación Vacunas Extracción de garrapatas Profilaxis antibiótica

8 ESTUDIO: Estudio de garrapatas de tapires andinos, ganado bovino y vegetación, y de las bacterias que vehiculan en un área protegida de Ecuador Buenos días, soy Cristina Pesquera y les voy a presentar mi trabajo fin de máster, que tiene por título “Estudio de garrapatas de tapires andinos, ganado bovino y vegetación, y de las bacterias que vehiculan en un área protegida de Ecuador”. 12 minutos máximo Cristina Pesquera Alegría Máster en Biodiversidad en Áreas Tropicales y Conservación Universidad Tecnológica Indoamérica, Universidad Internacional Menéndez Pelayo y Centro Superior de Investigaciones Científicas 8

9 Tapirus pinchaque, Roulin 1829
EN CR Orden Perissodactyla Población < 2500 individuos El tapir andino, o Tapirus pinchaque, es un mamífero del orden perisodáctila. Está considerado en peligro de extinción por la Unión Internacional para la Conservación de la Naturaleza y catalogado en peligro crítico en Ecuador. Se estima que persisten menos de 2500 individuos, cuya distribución está restringida a la Cordillera Andina de Colombia, Ecuador y Noreste de Perú, en una franja que se extiende desde 1400 m de altitud hasta la línea de nieves perpetuas. >1400m <

10 Pérdida y fragmentación de hábitat Invasión en santuarios
Páramo Bosque andino Hábitat Pérdida y fragmentación de hábitat Invasión en santuarios Transmisión de enfermedades Los principales hábitats utilizados por esta especie son el páramo y el bosque andino. Sin embargo, la creciente ganadería está provocando la pérdida y fragmentación de este tipo de hábitats. Además, se ha visto que el ganado invade los santuarios remanentes de esta especie, modificando la superficie y tipo de hábitat utilizado por el tapir. Por otro lado, existe un riesgo serio de transmisión de enfermedades inducido por la ganadería, como ya se ha documentado para otras especies de tapir. Este estudio se ha desarrollando paralelamente al Proyecto de Conservación del Tapir Andino en la zona de Amortiguamiento de la Reserva Ecológica Antisana y el Parque Nacional Cayambe-Coca, al que en lo sucesivo nos referiremos como Proyecto Tapir. Uno de los objetivos de éste es evaluar el estado sanitario de esta especie. Programa de Conservación del tapir andino (Tapirus pinchaque) en la zona de amortiguamiento de la Reserva Ecológica Antisana y el Parque Nacional Cayambe Coca

11 Interacción permanente Transmisión mutua

12 Borrelia Anaplasma Ehrlichia Rickettsia
<drugline.org> Estos géneros de garrapatas vehiculan, entre otros, bacterias de los géneros borrelia, anaplasma, ehrlichia y rickettsia. Todas ellas gram-negativas. El género Borrelia está formado por espiroquetas flageladas, entre las que se encuentran el grupo B. Burgdorferi sensu lato, causantes de la Enfermedad de Lyme. Anaplasma y Ehrlichia son pleomorfos de crecimiento intracelurar obligado. Están estrechamente relacionadas entre si y se engloban dentro de las alfa-proteobacterias, siendo causantes de múltiples enfermedades de humanos y animales. Las bacterias del género Rickettsia son cocobacilos de crecimiento intracelular obligado y son responsables de distintas enfermedades catalogadas dentro de 2 grandes grupos, el grupo de las fiebres manchadas y el grupo tifus. En Ecuador son escasas las evidencias para Anaplasma, Ehlichia y Rickettsia. En cuanto al tapir, apenas hay estudios sobre la detección de bacterias transmitidas por garrapatas en tapires, sin embargo, el TSG plantea que deberían estudiarse estos ectoparásitos y las bacterias que pueden transmitir. Las enfermedades transmitidas por garrapatas tienen también gran importancia en ganadería, ya que pueden provocar importantes pérdidas económicas. Este es el caso de la tristeza bovina, que provoca anemia y fiebre, afectando a la producción lechera, abortos y mortalidad y cuyo agente causal es Anaplasma marginale, entre otros. Conocer los patógenos que vehiculan las garrapatas resulta útil para evaluar el riesgo de infección en veterinaria e incluso en salud humana, por lo que propusimos los siguientes objetivos para este estudio. <

13 Objetivos 1 Conocer las especies de garrapatas que parasitan el tapir andino, el ganado bovino y las presentes en la vegetación de la zona de amortiguamiento de la Reserva Ecológica Antisana y el Parque Nacional Cayambe-Coca. Conocer las especies de garrapatas que parasitan el tapir andino, el ganado bovino y las presentes en la vegetación de la zona de amortiguamiento de la Reserva Ecológica Antisana y el Parque Nacional Cayambe-Coca. Así como determinar la presencia de las bacterias de los géneros Borrelia, Anaplasma, Ehrlichia y Rickettsia en las garrapatas recogidas sobre tapires andinos, ganado bovino y vegetación de la zona de estudio. 2 Determinar la presencia de las bacterias de los géneros Borrelia, Anaplasma, Ehrlichia y Rickettsia en las garrapatas recogidas sobre tapires andinos, ganado bovino y vegetación de la zona de estudio.

14 Metodología Área de estudio 736 km2 2000-5400 m
El área de estudio se encuentra en la zona de amortiguamiento de la Reserva Ecológica Antisana y el Parque Nacional Cayambe-Coca, provincia de Napo, Ecuador. Concretamente en la cuenca del río Papallacta y tiene una extensión de 736 km2 con una gran variación altitudinal. Este hecho le confiere una extraordinaria diversidad climática y biológica, que convive junto a una importante cabaña ganadera. En el mapa en detalle se puede observar el muestreo realizado, en el que se analizaron 7 tapires andinos, 20 ganaderías y 10 transectos en busca de garrapatas, como se explica en la siguiente diapositiva. Área de estudio 736 km2 m

15 Recogida de garrapatas
7 x 20 x 6 x 4 x 75 66 20 Captura directa X 13 Captura directa Técnica de la bandera 10 x 2 x La recogida de garrapatas se realizó desde mayo a octubre de 2011 y puntualmente en febrero de 2012. Tanto en el caso de los tapires como en el ganado la recogida de garrapatas se realizó por captura directa. En el caso del tapir, fue el equipo veterinario del Proyecto Tapir el encargado de la recogida de garrapatas, puesto que el protocolo establecido para las capturas no permitía mi presencia ante el animal anestesiado. Así, se obtuvieron 75 garrapatas procedentes de 6 tapires de los 7 analizados. El número de tapires andinos estudiados y la localización de las capturas responde a los requerimientos del Proyecto Tapir. Debe tenerse en cuenta que se trata de una especie en peligro de extinción. En cuanto al ganado, se obtuvieron 66 garrapatas de 13 bóvidos pertenecientes a 4 ganaderías diferentes de las 20 incluidas en el estudio. En este caso, fueron los propios ganaderos los encargados de su recogida, ya que la presencia de gente extraña provoca nerviosismo a los animales y de este modo las molestias ocasionadas tanto a los ganaderos, como a los animales, fueron menores. Por último, para la recogida de garrapatas de vegetación se recorrieron 10 transectos de 2 km de longitud en dos ocasiones y se obtuvieron 20 garrapatas en 2 de ellos, combinando captura directa y la técnica de la bandera. Los transectos y fechas en que se recorrieron fueron los establecidos para el Proyecto Tapir, debido al difícil acceso a determinadas zonas del área de estudio y por razones de seguridad. Las garrapatas se almacenaron en tubos tipo eppendorf con alcohol absoluto hasta su procesamiento. 2 Km Conservación en alcohol absoluto

16 Análisis de laboratorio
Identificación de garrapatas Morfológica Genética Detección de bacterias en garrapatas Extracción ADN PCR Secuenciación ARNr 16S Garrapatas ARNr 12S ITS2 flaB / ARNr 5S-23S Borrelia msp2 / ARNr 16S Anaplasma ARNr 16S (EHR/GEP) Ehrlichia gltA / ompA Rickettsia Ya en el laboratorio, se realizaron los análisis pertinentes para la identificación de garrapatas y la detección de bacterias en éstas. La identificación de garrapatas se realizó morfológicamente, con ayuda de una lupa binocular y claves de la región Neotropical y genéticamente. Tanto la identificación genética como la detección de bacterias en garrapatas se efectuó mediante técnicas basadas en PCR. Para ello, las garrapatas se sometieron individualmente a un protocolo de limpieza y se cortaron longitudinalmente. Una de las mitades se sometió a extracción de ADN mediante el kit comercial DNeasy Blood & Tissue de Qiagen. Con los extractos obtenidos se realizaron diversas PCRs con cebadores específicos para la amplificación distintos fragmentos. En el caso de las garrapatas, se amplificaron fragmentos de ARN ribosomal 16S, 12S y el espacio intergénico 2. Así mismo, se utilizaron cebadores especificos para la amplificación de dos fragmentos del genoma bacteriano de cada uno de los géneros de bacterias en estudio. FlaB y ARNr 5S-23S para Borrelia, msp2 y ARNr 16S para Anaplasma, 2 fragmentos del ARNr 16S para Ehrlichia y gltA y ompA para Rickettsia. Los resultados de PCR se visualizaron mediante electroforesis en gel horizontal de agarosa y aquellos resultados positivos, correspondientes al tamaño de banda esperado, se secuenciaron en la unidad de Diagnóstico Melecular del Centro de Investigación Biomédica de La Rioja. Por último, las secuencias obtenidas se compararon con las secuencias disponibles en GenBank mediante la herramienta BLAST. HASTA AQUÍ SON UNOS 7 MINUTOS LEYENDO LO ESCRITO

17 Resultados y discusión
Clasificación de garrapatas Como acabamos de comentar, la clasificación de garrapatas se ha realizado mediante identificación morfológica y molecular. Sin embargo, hemos encontrado dificultades relacionadas con la identificación de los ejemplares debido principalmente a la escasez de secuencias publicadas y a la falta de consenso sobre los genes y los porcentajes de identidad que permiten diferenciar las especies. Además, en 2 casos se han obtenido resultados contradictorios entre morfología y genética, no pudiendo llegar a determinar la especie. Pese a ello, consideramos que la identificación molecular ha evitado que incurramos en errores taxonómicos, como es el caso de Amblyomma spp. Este estudio se ha llevado a cabo en 161 ejemplares de garrapatas, y todas ellas corresponden a ejemplares adultos o ninfas, no habiéndose encontrado ninguna larva. 95 de las garrapatas halladas corresponden al género Amblyomma y se identificaron como 2 especies diferentes, Amblyomma multipunctum y Amblyomma spp. 85 garrapatas se identificaron morfológicamente como Amblyomma multipunctum pero su clasificación no se pudo comprobar genéticamente debido a la falta de secuencias publicadas de esta especie. Las secuencias obtenidas del 16S y del 12S, mostraron una identidad máxima del 90% y 88%, respectivamente, con secuencias publicadas de otras especies del género Amblyomma. Como hemos mencionado, no existe consenso en la taxonomía molecular de garrapatas, pero algunos estudios muestran identidades de hasta un 97% entre secuencias 16S de distintas especies de este género. Así, consideramos que un porcentaje del 90% es insuficiente para asociarlas a estas especies, por lo que se clasificaron definitivamente como Amblyomma multipunctum. Por otro lado, la comparación de las secuencias obtenidas permitió clasificar 7 machos con distinto morfotipo dentro de la especie Amblyomma multipunctum, siendo finalmente 91 las garrapatas así identificadas. Las 4 garrapatas restantes de este género se identificaron como Amblyomma scalpturatum en base a sus caracteres morfológicos. Las secuencias obtenidas para el 12S e ITS2 mostraron una identidad de 87 y 90%, respectivamente, con secuencias publicadas de esta especie, siendo ligeramente mayores los valores obtenidos para otras especies del género. Por tanto, debido a la discordancia entre morfología y genética, estas garrapatas se identificaron como Amblyomma spp. Actualmente estamos trabajando con esta especie porque parece que se podría tratar de una especie no descrita o de una de las especies históricamente descritas que se relegaron a sinonimias de A. scalpturatum, como es el caso de A. latepunctatum, recientemente validada de nuevo como especie. Todas las garrapatas del género Amblyomma se hallaron en tapir andino y vegetación, 75 y 20 ejemplares respectivamente. Entre las garrapatas de tapir andino hemos identificado ejemplares de A. multipunctum y Amblyomma spp. Cabe destacar que la especie Amblyomma spp. únicamente se halló en uno de los tapires andinos estudiados. En cuanto a A. multipunctum, es una especie asociada a tapires y la única de este género descrita hasta el momento para el tapir andino. Ésta es la única especie hallada en la vegetación, habiéndose encontrado 8 ejemplares asociados a pelos de tapir andino en un rascadero frecuentado por esta especie. Amblyomma multipunctum Amblyomma spp. ♂ ♀ n=25 ninfa ♂ n=54 n=12 n=4

18 Clasificación de garrapatas
Rhipicephalus microplus En cuanto al ganado, se recogieron un total de 66 garrapatas. 60 de ellas se identificaron morfológicamente como R. microplus, hecho que se confirmó mediante el estudio de secuencias nucleotídicas del 16S. Las restantes 6 garrapatas corresponden al género Ixodes. 5 de ellas se clasificaron como I lasallei por sus caracteres morfológicos. El análisis del fragmento 16S estudiado arrojó una identidad máxima del 90% con esta especie, al compararlo con las secuencias depositadas en GenBank. La Dra. Valeria Castillo, experta en este género, sugiere que podríamos considerarlas afines a I. lasallei, tras su visualización y la comparación con secuencias no publicadas. No obstante, es necesario un mayor estudio taxonómico de las mismas. Debido a la complejidad y hetorogeneidad de este grupo consideramos que lo más prudente es clasificarlas finalmente como Ixodes spp. Por último, una garrapata se clasificó morfológicamente como Ixodes boliviensis. No se dispone de secuencias publicadas de esta especie por lo que no se pudo corroborar su identificación genéticamente. Se obtuvieron identidades inferiores al 90% con otras especies del género, por lo que finalmente interpretamos que se trataba de la especie Ixodes boliviensis. Tanto R microplus como I boliviensis se han descrito previamente en ganado, pero hasta el momento no se había descrito I boliviensis en Ecuador. Las especies de garrapata halladas en el ganado difieren completamente de las encontradas en tapir andino y vegetación. Sin embargo, hay evidencias de R microplus e I. boliviensis en otras especies de tapires. Además, teniendo en cuenta que nuestro estudio está restringido espacial y temporalmente no descartamos la posibilidad de que tapires andinos y ganado puedan compartir estos ectoparásitos. Ixodes spp. Ixodes boliviensis ♂ n=16 ♀ ninfa ♀ n=5 ♀ n=1 n=38 n=6

19 Pontificia Universidad Católica del Ecuador
Detección de bacterias Pontificia Universidad Católica del Ecuador Un ejemplar de cada especie y estadio se depositó en el Museo de Zoología de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador, por lo que 151 fueron las garrapatas analizadas individualmente en busca de bacterias de los géneros Borrelia, Anaplasma, Ehrlichia y Rickettsia, como se detalla en la tabla superior.

20 Detección de bacterias
Hospedador/ Localización Nº garrapatas estudiadas Especie garrapata (nº) Borrelia Anaplasma Ehrlichia Rickettsia 74 A. multipunctum (1) - 61 R. microplus* (15) 3 16 Total 151 En cuanto a la detección de bacterias, tanto en garrapatas procedentes de tapir andino, como de vegetación, únicamente se ha obtenido un resultado positivo, que corresponde al género Anaplasma. Sin embargo, en las garrapatas estudiadas de ganado bovino se han hallado un total de 16 resultados positivos, 8 para Anaplasma, 5 para Ehrlichia y 3 para Rickettsia, no habiéndose hallado Borrelia en ninguna de las garrapatas estudiadas. Además, cabe destacar que un ejemplar de R. microplus mostró coinfección por Anaplasma spp. y Rickettsia spp. En las ninfas estudiadas (A. multipunctum y R. microplus) no se ha detectado la presencia de las bacterias objeto de estudio Serologías negativas * Coinfección por Anaplasma spp. y Rickettsia spp. (n=1) Análisis serológicos negativos

21 Detección de bacterias
Hospedador/ Localización Nº garrapatas estudiadas Especie garrapata (nº) Borrelia Anaplasma Ehrlichia Rickettsia 74 A. multipunctum (1) - 61 R. microplus* (15) 3 16 Total 151 Las PCRs utilizadas para la detección de Anaplasma mostraron 10 resultados positivos en 2 ejemplares de Amblyomma multipunctum, uno de tapir andino y otro de vegetación, así como en 8 ejemplares de R. microplus procedentes de un solo bóvido. En todos los casos las secuencias obtenidas mostraron máxima identidad con la especie Anaplasma phagocytophilum, pese a que se apreció cierta variabilidad entre las secuencias obtenidas. Es la primera vez que se detecta esta especie en tapires y en Ecuador. Así mismo, no se había detectado hasta ahora en garrapatas de la especie Amblyomma multipunctum, pero sí en R. microplus. Cabe destacar que los análisis serológicos realizados a los tapires andinos no mostraron resultados positivos para este género. Las PCRs utilizadas para la detección de Anaplasma mostraron 10 resultados positivos en 2 ejemplares de Ambyomma multipunctum, uno de tapir andino y otro de vegetación, así como en 8 ejemplares de R. microplus procedentes de un solo bóvido. 2 muestras resultaron positivas para ambos genes estudiados, msp2 y 16S, mientras que el resto fueron positivas únicamente utilizando msp2 como diana de PCR. En todos los casos las secuencias obtenidas mostraron máxima identidad con la especie Anaplasma phagocytophilum, pese a que se apreció cierta variabilidad entre las secuencias obtenidas. Es la primera vez que se detecta esta especie en tapires y en Ecuador. Así mismo, no se había detectado hasta ahora en garrapatas de la especie Amblyomma multipunctum, pero sí en R. microplus de China. Se detecta por primera vez A. phagocytophylum en Ecuador y en garrapatas recogidas de tapires A. phagocytophilum

22 Detección de bacterias
Hospedador/ Localización Nº garrapatas estudiadas Especie garrapata (nº) Borrelia Anaplasma Ehrlichia Rickettsia 74 A. multipunctum (1) - 61 R. microplus* (15) 3 16 Total 151 Las dianas de PCR utilizadas para la amplificación de Ehrlichia mostraron 5 resultados positivos correspondientes a garrapatas de la especie R. microplus de 3 bóvidos diferentes procededentes de 2 ganaderías. La máxima identidad obtenida con especies validadas del género Ehrlichia no superó el 95%, mientras que las secuencias obtenidas mostraron un 100% de identidad con varias especies del género Anaplasma, como A. phagocytophilum, A. marginale y A. ovis. Se ha visto que los cebadores empleados para la detección de Ehrlichia también amplifican regiones de Anaplasma, debemos tener en cuenta que se trata de géneros muy próximos. Sin embargo, no se ha podido llegar a nivel de especie. Hay evidencias de A. marginale, A. ovis y A. centrale en garrapatas R. microplus recogidas en ganado. Como he comentado anteriormente, se ha detectado A. marginale en esta especie de garrapata recogida en bóvidos de Ecuador. Por otro lado, las especies de Anaplasma con las que se ha obtenido 100% de similitud son agentes causales de la anaplasmosis bovina, y A. marginale se ha implicado como responsable de esta enfermedad en Ecuador. Cabe destacar que uno de los bóvidos con garrapatas positivas para este género presentó un cuadro febril en días posteriores a la recogida de garrapatas. Las dianas de PCR utilizadas para la amplificación de Ehrlichia mostraron 5 resultados positivos correspondientes a garrapatas de la especie R. microplus de 3 bóvidos diferentes procededentes de 2 ganaderías. 3 muestras fueron positivas para ambos fragmentos, mientras que 2 fueron positivas sólo para uno de ellos. La máxima identidad obtenida con especies validadas del género Ehrlichia no superó el 95%, mientras que las secuencias obtenidas mostraron un 100% de identidad con varias especies del género Anaplasma, como A. phagocytophilum, A. marginale, A. ovis y A. centrale. Se ha visto que los cebadores empleados para la detección de Ehrlichia también amplifican regiones de Anaplasma, debemos tener en cuenta que se trata de géneros muy próximos. Sin embargo, no se ha podido llegar a nivel de especie. Hay evidencias de A. marginale, A. ovis y A. centrale en garrapatas R. microplus recogidas en ganado. De hecho, recientemente se ha detectado A. marginale en esta especie de garrapata recogida en bóvidos de Ecuador. Por otro lado, las 4 especies de Anaplasma con las que se ha obtenido 100% de similitud son agentes causales de la anaplasmosis bovina, y A. marginale se ha implicado como responsable de esta enfermedad en Ecuador. A. marginale A. ovis A. phagocytophilum Anaplasma spp.

23 Detección de bacterias
Hospedador/ Localización Nº garrapatas estudiadas Especie garrapata (nº) Borrelia Anaplasma Ehrlichia Rickettsia 74 A. multipunctum (1) - 61 R. microplus* (15) 3 16 Total 151 Para el género Rickettsia se obtuvieron 3 resultados positivos en garrapatas de la especie R. microplus procedentes de 2 bóvidos de 2 ganaderías diferentes. Las mayores identidades se obtuvieron para R. monacensis y R. tamurae. Sin embargo, de acuerdo al consenso establecido por expertos y considerando la similitud obtenida para la ompA, es posible que nos encontremos ante una potencial nueva especie de Rickettsia. No obstante, es necesario el estudio de nuevos genes para su caracterización genética, aspecto en el que estamos trabajando. En la actualidad se están detectando potenciales nuevas especies de Rickettsia en Sudamérica. Hasta el momento, son 13 las especies de Rickettsia descritas en Sudamérica, algunas de ellas en R. microplus, aunque no hay evidencias de Rickettsia en garrapatas de Ecuador. Para el género Rickettsia se obtuvieron 3 resultados positivos en garrapatas de la especie R. microplus procedentes de 2 bóvidos de 2 ganaderías diferentes. 3 muestras fueron positivas para la gltA y mostraron una identidad máxima del 99% con R. monacensis, R. tamurae y R. asiatica. Mientras que 2 muestras fueron positivas para la ompA, siendo la máxima similitud del 96% con las especies R. monacensis y R. tamurae. De acuerdo al consenso establecido por expertos y considerando la similitud obtenida para la ompA, es posible que nos encontremos ante una potencial nueva especie de Rickettsia. No obstante, es necesario el estudio de nuevos genes para su caracterización genética, aspecto en el que estamos trabajando. En la actualidad se están detectando potenciales nuevas especies de Rickettsia en Sudamérica. Hasta el momento, son 13 las especies de Rickettsia descritas en Sudamérica, algunas de ellas en R. microplus, aunque no hay evidencias de Rickettsia en garrapatas de Ecuador. Se detecta por primera vez Rickettsia spp. en garrapatas de Ecuador, concretamente en 3 R. microplus de ganado bovino mediante PCR de gltA y ompA El análisis de secuencias de gltA y ompA sugiere la circulación de una potencial nueva especie de Rickettsia en Ecuador R. monacensis R. tamurae Rickettsia spp.

24 Conclusiones 1 No se evidencia que tapir andino y ganado bovino sean hospedadores de las mismas especies de garrapatas 2 Se demuestra la circulación de bacterias del género Anaplasma y Rickettsia en Ecuador y advierten del potencial riesgo de transmisión de enfermedades con importancia médico-veterinaria 3 Las principales conclusiones de este estudio son las siguientes Se desconoce la patogenicidad de las bacterias halladas, especialmente para el tapir de montaña. 4 Es necesario un mayor conocimiento de su epidemiología y patogenicidad, así como la divulgación de esta información. 24

25 Agradecimientos Mis agradecimientos van destinados al Máster en Biodiversidad en áreas tropicales y su conservación, y sus instituciones auspiciantes. Al los organismos implicados en el Proyecto Tapir y al Centro de Investigación Biomédica de La Rioja por su gran apoyo en este estudio. A mis tutores, Jose Antonio Oteo y Aránzazu Portillo, por su buen criterio y sus consejos. A José Manuel Venzal A todos los compañeros de trabajo, tanto de las salidas de campo, como del laboratorio. A Ana Palomar y Mauricio Ortega por su especial implicación Y, por supuesto, a mi familia y amigos por su incondicional apoyo

26 Para finalizar, quería disculparme por no haber podido asistir en persona a la defensa. Espero que la presentación se haya entendido bien pese a estas dificultades y, en cualquier caso, les invito a que me pregunten cualquier duda que les haya podido surgir tanto de la memoria como de la exposición. Muchas gracias, doy paso al turno de preguntas