Resultados Inducción y Restricción Bioquímica Experimental Grupo 1 Resultados Inducción y Restricción Equipo 3
Inducción
Recordando….
Recordando…. La proteína tiene un peso molecular aproximado de: 32 kDa si tiene el péptido señal de la proteína ompA 29 kDa sin péptido señal.
Lo que esperabamos…. 1. Aumento gradual en la intensidad de la banda de la proteína expresada dado que cada mesa utilizó diferentes concentraciones de inductor. 2. La concentración de proteína expresada será mayor conforme aumenta el tiempo trascurrido después de la inducción con el IPTG.
Lo que esperabamos…. 3. Las bandas pertenecientes a las proteínas de las células también se verán más intensas debido al crecimiento celular, sin embargo no serán tan intensas como la de la proteína inducida.
Lo que esperábamos…. Teñido con la solución de Coomasie 0.12% azul de coomasie R250 50% Metanol 10% ácido acético Desteñido con: 45% Metanol Tiempo de inducción 0 0.5 1.0 1.5 Std
Lo que obtuvimos…. Equipo 1 y 2 Equipo 3 y 4
Lo que obtuvimos…. Equipo 5 y 6 Equipo 7
Que observamos.. A pesar de que se utilizaron 3 concentraciones distintas de inductor las bandas señaladas con la flecha aparentan tener la misma intensidad lo que indicaría que se obtuvieron cantidades iguales de proteína inducida. Se obtuvo, de acuerdo con el estándar, la proteína en un peso molecular cercano al esperado.
Restricción de plásmido Pet-TEM
Pásmido + inserto1 Pásmido + inserto2 Marcador de PM Plásmido Inserto 1 Inserto 2
Recordando… 66500 pb 5310 pb
Estándar de peso molecular
Gel de muestra 1 Std 2 Sin restringir 3 BamHI 4 BamHI+NdeI 1 2 3 4 5 6 Topoisomero alto peso molecular Vector recombinante linearizado 1 Std 2 Sin restringir 3 BamHI 4 BamHI+NdeI 5 NdeI(30 min)+ BamHI (OVN) 6 NdeI (OVN) OVN toda la noche Vector vacío Banda inserto RNA y/o proteínas de bajo peso
Resultados 1. Plasmido sin restringir 2. restringido con una enzima 1 2 3 4 1. Plasmido sin restringir 2. restringido con una enzima 3. restringido con las dos enzimas 4. estándar Plásmido sin restringir ADN restringido con una enzima Bandas esperadas RNA y/o proteínas de bajo peso