Objetivos Estudiar el clivaje del CD44 inducido por el ácido hialurónico y su incidencia en la migración de células tumorales. Estudiar la relación.

Presentación del tema: "Objetivos Estudiar el clivaje del CD44 inducido por el ácido hialurónico y su incidencia en la migración de células tumorales. Estudiar la relación."— Transcripción de la presentación:

1 Clivaje del CD44 y promoción de la migración en células tumorales inducido por Acido Hialurónico

2 Objetivos Estudiar el clivaje del CD44 inducido por el ácido hialurónico y su incidencia en la migración de células tumorales. Estudiar la relación de este clivaje y migración con el peso molecular de ácido hialurónico.

3 Acido hialurónico (HA): Es un glicosaminoglicano formado por dímeros de ácido glucurónico y N-acetilglucosamina. No se encuentra sulfatado ni unido a proteínas Es un constituyente de la matriz extracelular Interacciona con el CD Favorece la migración y adhesión celular y esto está mas favorecido por los fragmentos de HA

4 La fragmentación de HA puede darse in vivo por:  medios enzimáticos  degradación de HA por radicales libres  síntesis de novo de HA de bajo peso molecular La fragmentación de HA in vitro se hace por:  HAasa de testículo fragmentos de HA  HAasa de Streptococcus Disgalactiae monómeros de HA

5 CD44: Es una molécula de adhesión que actúa como receptor de membrana y se encuentra muy distribuida en el organismo. Presenta :  un dominio extracelular: unión a HA  un dominio intracelular: unión a citoesqueleto Está implicada en muchos procesos biológicos, como:  interacción célula-célula  interacción célula-matriz extracelular  trasporte y endocitosis de HA El clivaje de CD44 da in vivo por:  metaloproteasas  serinproteasas El clivaje de CD44 da in vitro por:  ésteres de forbol (PMA)

6 Interacción entre CD44 y HA relacionada con cáncer: Se conocen casos de cáncer con:  alta producción de HA  presencia de HA de bajo peso molecular  alta actividad de HAasa

7 Resultados Fragmentos de HA inducen el clivado de CD44 en líneas celulares MIA PaCa-2 de carcinoma pancreático humano. La línea celular MIA PaCa-2 expresa CD44. Análisis por Citometría de Flujo Sin Anti CD44-FL . Con Anti CD44-FL Número de células Intensidad de Fluorescencia

8 Las células se unen a las moléculas de HA
MIA PaCa-2 MIA PaCa-2 + FL-HA Número de células Intensidad de Fluorescencia Las células requieren CD44 para interaccionar con las moléculas de HA MIA PaCa-2+ Anti-CD44 + FL-HA MIA PaCa-2+ Ig G Ratón + FL-HA Número de células Intensidad de Fluorescencia

9 Análisis por inmunoblotting
En el crecimiento tumoral, las células presentan una alta actividad de clivaje del CD44. Células MG /- PMA SDS Anti CD44 Anti-b-tubulina Análisis por inmunoblotting

10 Análisis por ELISA Se tomaron los sobrenadantes de los tratamientos con o sin PMA.

11 Las células tratadas con fragmentos de HA (6-14 mers) inducen el clivaje del CD44 de una manera dependiente de la concentración de HA. HAasa de testículo de oveja HA (200 kDa) frHA (6-14 mers) HPLC

12 frHA inducen el clivaje del CD44.
El mismo es dependiente de la concentración de frHA. El clivaje es dependiente del PM del HA.