EVALUACION DE LA TÉCNICA DE ELISA INDIRECTA COMO TEST DIAGNÓSTICO PARA LA DETECCION DE LEPTOSPIROSIS HUMANA, ICA-LNDV,2006

DOCENTE DIRECTOR: MARIA CRISTINA VASQUEZ ESTUDIANTES QUE PARTICIPAN EN EL PROYECTO: EDWARD JOHNNY ZAMBRANO MORA ELIDA MAYERLITH PINTO SAAVEDRA ENITH CASTILLA GOMEZ INSTITUCIONES PARTICIPANTES UDES ICA BIOGENIX

INTRODUCCION TAXONOMIA FAMILIA Spirochaetacea Leptospiraceae Trepomonema Borrelia Leptospira Interrogans (180 serotipos) Biflexa (60 serovares) 18 subgrupos

SEROGRUPOS Y SEROVARES MAS REPRESENTATIVOS DE L. Interrogans Australis australis , bratislava , lora Autumnalis autumnalis , forbragg , bim , weerasinghe Ballum ballum , aroborea Bataviae bataviae Canicola canicola Celledoni celledoni Cynopteri cynopteri Djasiman djasiman Grippotyphosa grippotyphosa , canalzonae, ratnapura Hebdomadis hebdomadis , jules , kremastos Hurstbridge hurstbridge Icterohaemorrhagiae icterohaemorrhagiae , copenhageni , lai Zimbabwe  

SEROGRUPOS Y SEROVARES MAS REPRESENTATIVOS DE L. Interrogans Javanica javanica , poi Louisiana louisiana , lanka Manhao manhao Mini mini , georgia , swajizak Panama panama , mangus Pomona pomona Pyrogenes pyrogenes Ranarum ranarum Sarmin sarmin Sejroe sejroe,saxkoebing,hardjo Semaranga patoc Shermani shermani Tarassovi tarassovi Pumarola, 1994; Levett, 2001. (Modificado)

RESERVORIOS Y SUS SEROVARES ESPECIE SEROVAR Ganados y búfalos hardjo, pomona, icterohaemorragiae, bratislava, canícola, tarassovi Cerdos pomona, tarassovi, bratislava Perros Canicola,bratislava, pomona, grippotyphosa, icterohaemorragiae Caballos grippotyphosa, icterohaemorragiae Pumarola, 1994; Levett, 2001. (Modificado)

INFECCIONES POR HANTAVIRUS LEPTOSPIROSIS ANTROPOZOONOSIS DE DISTRIBUCION MUNDIAL ANIMALES SILVESTRES DOMESTICOS HOMBRE HOSPEDADOR DE MANTENIMIENTO DENGUE HEMORRRAGICO HEPATITIS VIRAL INFECCIONES POR HANTAVIRUS ACCIDENTAL

EPIDEMIOLOGIA Los países tropicales y subtropicales son los más afectados por sus condiciones climáticas. Precipitación Temperatura Humedad relativa El pH, estructura La composición de suelo Son favorables para la presentación de Leptospira. La OMS ha estimado una tasa de incidencia en humanos entre 4-100 casos por 100 000 habitantes en estos países (22).

EPIDEMIOLOGIA La seropósitividad de estudios hechos indican (2): El salvador 17.5%, México 14.1%, Colombia 18.5%, Brasil 9.8% Argentina 3.8%

SEROVARES MAS FRECUENTES ENCONTRADOS EN COLOMBIA EPIDEMIOLOGIA SEROVARES MAS FRECUENTES ENCONTRADOS EN COLOMBIA TOMADO DE :Acosta Helbert, Moreno Carlos Hugo, Viafara B Daniel. Leptospirosis. Revision de tema, Colombia médica, Universidad del Valle, Cali, 1994 ; 25: 36-42.

TRANSMISION

PATOGENIA Y SINTOMAS FORMA ICTERICA FORMA ANICTERICA

SINTOMATOLOGIA ANIMAL

DIAGNOSTICO TECNICAS O METODOS DIRECTOS INDIRECTOS Observacion de campo oscuro Tinciòn argenica Tinciòn inmunohistoquimica Deteccion de acidos nucleicos Aislamiento MAT Msat Fijación del complemento ELISA Aglutinación microscópica Aglutinación en microcapsula Hemoaglutinación indirecta

TECNICA DE MICROAGLUTINACION (MAT) DIAGNOSTICO TECNICA DE MICROAGLUTINACION (MAT) Detectar anticuerpos aglutinantes en sueros Enfrentar a Ag (cultivos vivos de Leptospiras). Se divide en dos etapas Cualitativa Cuantitativa Determinar el titulo exacto de un suero si este contiene anticuerpos contra Leptospiras, NEGATIVO POSITIVO

DIAGNOSTICO MAT FASE CUALITATIVA FASE CUANTITATIVA Determina la presencia de Ac sin precisar el titulo exacto del suero. Determina el titulo exacto del suero. Si se observa el 50% de las Leptospiras aglutinan se reporta el resultado con un titulo de 1:100 Es la mayor dilución en la que se observa una aglutinación del 50%.

DIAGNOSTICO DESVENTAJAS MAT Necesidad de una infraestructura adecuada y de personal especializado y entrenado para su montaje, lectura e interpretación. Mantenimiento continuo de las cepas Ag. 7 a 15 días . + aglutinante La selección de los antígenos es un punto de vital importancia, cuando se comienza a trabajar en una zona donde no se conoce la prevalencia serológica. Con respecto a los serovares utilizados en cada batería no existe estandarización en la selección de los mismos. Dif result

DIAGNOSTICO VENTAJAS DEL ELISA Los laboratorios tienen capacitación, conocimiento y equipos necesarios para el procesamiento de una prueba de ELISA . disminuye los riesgos en Bioseguridad, además en el mercado se encuentra un kit comercial con un costo razonable. Elisa IgM se muestra mas sensible que el MAT en el comienzo de la fase aguda (11) permitiendo brindar un diagnostico diferencial oportuno con otras patologías de origen viral que presentan sintomatología similar. Por su rapidez la prueba de ELISA permite una confirmación diagnostica rápida y segura, útil también en situaciones epidémicas o brotes, posibilitando dirigir medidas de vigilancia y control epidemiológico. (Manuel Céspedes)

DIAGNOSTICO

OTROS METODOS SEROLOGICOS LeptoTek Dri Dot Ensayo: Aglutinacion en latex con suero. LEPTO Dipstick Ensayo: Detecta rápidamente anticuerpos IgM específicos de Leptospira en sangre total. LeptoTek Flujo Lateral Ensayo: Detecta anticuerpos IgM específicos-Leptospira en suero humano o las muestras de sangre total. FC y PCR DE LCR

DIAGNOSTICO DIFERENCIAL

FIEBRE AMARILLA: Duración de la viremia mas corta DENGUE: Intensidad de dolores musculares es mayor en dengue HEPATITIS: Inicio de fiebre menos brusco y de menor intensidad, desaparece cuando comienza la Ictericia MENINGOENCEFALITIS: LCR: leucocitosis – Meningitis bacteriana MALARIA: Hepatoesplenomegalia y anemia

PREVENCION Y CONTROL

Protección de trabajadores mediante el uso de calzado y vestimentas apropiadas (botas, delantal, guantes, antiparras, tapaboca). Higiene personal y del ambiente doméstico. Impedir el ingreso de animales al interior de los domicilios. Higiene y desinfección en los locales de ordeñe así como de las máquinas o instrumentos. Control de roedores. Inmunización. Antibioticoterapia.

Educación a la poblaciones de riesgo. Limpieza y desinfección de los domicilios que se inundan con solución de hipoclorito. Vacunación de la población canina. Vigilancia epidemiológica de las poblaciones consideradas de mayor riesgo. Educación y difusión de las posibles formas de adquirir la enfermedad y como evitarla.

Medidas de prevención, protección y control para los animales. Realizar el aislamiento de cepas de Leptospira spp. en distintas especies para conocer los serovalentes involucrados. Realizar estudios de reservorios silvestres. Realizar estudios epidemiológicos para estudiar la evolución de la enfermedad. Implementar programas de control de roedores e higiene ambiental.

PLAN DE VACUNACIÓN Primo vacunación: Se vacunan todos los animales del establecimiento, machos, hembras y terneros. 2da. Dosis a los 21 días de la 1ra dosis Revacunaciones en forma anual o semestral de acuerdo al laboratorio productor. Machos: vacunar antes de entrar al servicio para proteger al rodeo. Hembras: vacunar antes del servicio y previo a la parición. Terneros: vacunar a los 2 meses de edad y luego revacunar.

VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA

Notificación obligatoria ( Brasil, Cuba y Uruguay). CASO SOSPECHOSO: a) Caso notificado hasta demostración de lo contrario en la epidemiología. b) signos y síntomas sugestivos de la Enf mas Epidemiología compatible. CASO CONFIRMADO: a) Aislamiento de leptospiras. b) Serología positiva mediante la prueba de aglutinación microscópica (MAT) 2 mx

PREGUNTAS ? ? ? ? ? ? ? PREGUNTAS ? ? ? ? ? ? ?

GRACIAS