“Sistema de Filtración Amicon ®” Técnica de ULTRAFILTRACIÓN Alejandra Ramírez T. Equipo 2

CARACTERISTÍCAS Son filtros para centrífuga que proporcionan una ultrafiltración (<150 kD) rápida Capacidad para elevados factores de concentración (80X) y Fácil recuperación del concentrado a partir de matrices de muestras diluidas y complejas. Su diseño vertical y el área superficial disponible de la membrana permiten un rápido procesamiento de la muestra, Alta recuperación (normalmente > 90% de la disolución inicial), gracias a que hay un bloqueo automático físico del filtro que impide la centrifugación hasta sequedad y la posible pérdida de muestra. Rapidez: tiempo de procesamiento de 15 a 60 minutos. El concentrado se recoge del depósito utilizando una pipeta, mientras que el ultrafiltrado se recoge en el tubo de centrífuga suministrado.

NMWL: nominal molecular weight limit Presentación Estériles Diferentes volúmenes (1, 4, 15, 50 mL) Diferentes tipos de corte (límite de peso molecular nominal, NMWL, o peso molecular de corte, MWCO) ● Filtro Amicon® Ultra 3K — NMWL de 3.000 ● Filtro Amicon® Ultra 10K — NMWL de 10.000 ● Filtro Amicon® Ultra 30K — NMWL de 30.000 ● Filtro Amicon® Ultra 50K — NMWL de 50.000 ● Filtro Amicon® Ultra 100K — NMWL de 100.000 NMWL: nominal molecular weight limit La membrana de ultrafiltración Ultracel® posee amplia compatibilidad química, está sellada en el dispositivo por medio de calor (no adhesivos).

ACCESIBILIDAD. El diseño de membrana vertical permite el acceso directo de la pipeta a la muestra, lo que elimina la necesidad del paso de recuperación por centrifugado invertido.

Aplicaciones Concentración de muestras biológicas como antígenos, anticuerpos, enzimas, ácidos nucleicos, microorganismos, eluídos de columna y muestras purificadas. Purificación de componentes macromoleculares encontrados en extractos de cultivos tisulares y lisados celulares, eliminación de cebadores, conectores o etiquetas moleculares de una mezcla de reacción, y retirada de proteínas antes de la HPLC. Desalinización, Cambio de AMORTIGUADORES

¿QUÉ HICIMOS EN LA PRÁCTICA añadir 800 l de muestra de la fracción 3 ( la proteína en 75% de sulfato de amonio) adición de 1200 l de amortiguador mezclamos bien (volumen total 2 ml) centrifugación a baja velocidad a 4°C. desechamos la sal (volumen en el tubo de centrifuga) obtención de ______l de muestra (volumen en el contenedor de arriba) fracción desalada a la que denominamos fracción 4.