Práctica 1 Determinación de fosfato en bebidas de cola por espectrofotometría uv-vis Presentado por: Cabañas Borges Karen Ciau Mendoza José Antonio Ruiz Salazar Mónica Tun Vázquez Patricia

Objetivos: Conocer las partes y el manejo de un espectrofotómetro de UV-VIS. Realizar una curva de calibración para cuantificar, por UV-VIS, el contenido de fósforo en una muestra de refresco de cola.

Espectrofotometría UV-Vis Técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas.

Conceptos básicos. Una molécula cromofora es aquella que absorbe parte de la radiación incidente que incide sobre ella. Absorbancia: Indica la cantidad de luz absorbida por la molécula y se define como: −𝑙𝑜𝑔 𝑙 𝑡 𝑙 0

Instrumentación www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf (Consultado el 14 de Julio 2014)

Aplicaciones: Análisis cualitativo: es poco utilizado, debido a la existencia o no de cromóforos en la molécula Análisis cuantitativo: se debe tener en cuenta que la ley de Lambert-Beer no se cumple para concentraciones superiores a 0.02 M. García Bermejo Ma. José; Colom Valiente María Francisca. (2003). Manual Auxiliar de Laboratorio. 2ª edición. Ed. MAD. S.L. pp: 381

Análisis de sustancias que absorben por si mismas. Se pueden realizar: Análisis de sustancias que absorben por si mismas. Análisis de sustancias no absorbentes, las cuales se hacen reacción con un determinado reactivo, con el fin de producir una especie absorbente, con una concentración proporcional a la sustancia a medir. Análisis de mezclas. García Bermejo Ma. José; Colom Valiente María Francisca. (2003). Manual Auxiliar de Laboratorio. 2ª edición. Ed. MAD. S.L. pp: 381

Curva de calibración Relaciona las absorbancias con las concentraciones. Se realiza con soluciones de distinta concentración y a cada una de ellas se le establece su absorbancia a determinada longitud de onda. García Bermejo Ma. José; Colom Valiente María Francisca. (2003). Manual Auxiliar de Laboratorio. 2ª edición. Ed. MAD. S.L. pp: 381

Es indispensable la preparación de un blanco . Se requiere que la sustancia a determinar sea la única especie absorbente a la longitud de onda seleccionada. La muestra y patrones deben ser preparados de la misma forma antes de la medición de la absorbancia. Es indispensable la preparación de un blanco . La absorbancia del blanco se resta de todas las absorbancias a la longitud de onda elegida antes de hacer cualquier cálculo. Sara Aldabe. (2004). Química 2. 1ª edición. Ed. Colihue pp: 323

De la solución anterior, reparar 25 mL de una solución de 4 ppm. Preparación de disoluciones. Preparar 100 mL de una solución stock de 100 ppm de P2O5 a partir de fosfato monobásico de potasio o de fosfato dibásico de potasio De la solución anterior, reparar 25 mL de una solución de 4 ppm. Pesar 0.156 g de molibdato de amonio y disolver en 5 mL de agua destilada. 𝛼 1

Medir 2.2 mL de H2SO4 concentrado y diluir en 𝛼 1 Pesar 0.2112 g de ácido ascórbico y disolver en 10 mL de agua destilada. Medir 2.2 mL de H2SO4 concentrado y diluir en 15 mL de agua. Mezclar las tres soluciones anteriores y aforar a 50 mL con agua destilada.

Preparación de la curva de calibración. De la solución de trabajo, extraer alícuotas de 1, 2, 3, 4 y 5 mL. Agregar 4 mL de la solución reductora y aforar a 10 mL. Incubar durante 30 minutos a 50º C (baño María). A partir de la longitud de onda en la que se alcanza el máximo de absorción realizar el análisis de la curva de calibración y las muestras.

Análisis espectrofotométrico. Desgasificar aproximadamente 10 mL de la muestra. Tomar 1 mL de refresco desgasificado y aforar a 50 mL. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior depositar en un matraz aforado de 10 mL, Añadir 4 mL de solución reductora y aforar con agua destilada 𝛼 2

Incubar durante 30 minutos a 50º C (baño María). 𝛼 2 Trabajar un duplicado. Incubar durante 30 minutos a 50º C (baño María). Trabajar con un blanco de reactivos Realizar un barrido de exploración con el punto de la curva de calibración más concentrado, de 700 a 850 nm.

Cálculos previos. Preparación de 100 mL de solución stock de 100 ppm de 𝑃 2 𝑂 5 a partir de fosfato monobásico. Ppm= 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 𝑘𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 mg de soluto=(110ppm)(0.1Kg)= 10 mg de soluto 10mg x 1𝑔 1000 𝑚𝑔 =0.01𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜

Cálculos previos. Preparación de 25 mL de solución de trabajo de 4 ppm a partir de una solución de 100 ppm. C1V1=C2V2 C1=100 ppm V1=? V2=25 mL C2=4 ppm (4𝑝𝑝𝑚)(25𝑚𝐿) 100𝑝𝑝𝑚 =1 𝑚𝐿