Evaluación de la metodología analítica utilizada para determinar Fósforo Extraíble en muestras de Suelos Ing. Agr. Valeria Bortolotti Comisión de Suelos.

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1 Evaluación de la metodología analítica utilizada para determinar Fósforo Extraíble en muestras de Suelos Ing. Agr. Valeria Bortolotti Comisión de Suelos A.L.A.P. Asociación de Laboratorios Agropecuarios Privados

2 Extracción con solución de fluoruro de amonio- ácido clorhídrico
Breve descripción Método Bray Kurtz 1 modificado Norma IRAM-SAGPyA Esquema 2 (Septiembre 2009) Extracción con solución de fluoruro de amonio- ácido clorhídrico

3 Objeto de aplicación (1)
Norma IRAM-SAGPyA Objeto de aplicación (1) Evaluar la fertilidad fosforada edáfica Aplicable a suelos levemente ácidos

4 Documentos normativos consulta (2)
Norma IRAM-SAGPyA Documentos normativos consulta (2) Definiciones (3)

5 Principio (4) Norma IRAM-SAGPyA 29570-1 El ensayo comprende 2 etapas:
Extracción Determinación espectrofotométrica

6 Principio (4) Norma IRAM-SAGPyA 29570-1 EXTRACCIÓN:
Solución de fluoruro de amonio y ácido clorhídrico, remueve del suelo las formas de fósforo fácilmente solubles en ácidos (fosfatos de calcio, hierro y aluminio).

7 Principio (4) Norma IRAM-SAGPyA 29570-1
DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA: Los iones fosfatos al reaccionar con una solución ácida que contiene iones molibdato y antimonio forman una molécula compleja ácida de fosfato-molibdato-antimonio, que en presencia de ácido ascórbico se reduce y desarrolla un color azul de intensidad proporcional a la concentración de iones fosfato . .

8 Fluoruro de amonio 0,03 mol/L Y Ácido Clorhídrico 0,025 mol/L
Norma IRAM-SAGPyA Reactivos (5) SOLUCIÓN EXTRACTORA Fluoruro de amonio 0,03 mol/L Y Ácido Clorhídrico 0,025 mol/L Ajustar el pH a 2,6 (hidróxido de amonio y ácido clorhídrico diluído)

9 Reactivos (5) SOLUCIONES PARA COLORIMETRÍA Norma IRAM-SAGPyA 29570-1
SOLUCIÓN A: Ácido Sulfúrico (48 ml ± 2 ml) Molibdato de Amonio (4,3 g ± 0,02 g) Tartrato de antimonio y potasio( 0,1 g ± 0,02 g) a 1000 ml con agua desionizada SOLUCIÓN B: Ácido ascórbico (0,2 g ± 0,02 g) en 100 ml agua desionizada + 50 ml. SOLUCIÓN A Llevar a vol final 200 ml. Se prepara inmediatamente antes de su uso

10 Reactivos (5) SOLUCION DE REFERENCIA: 100 mg/L P
Norma IRAM-SAGPyA Reactivos (5) SOLUCION DE REFERENCIA: 100 mg/L P Dihidrógeno fosfato de potasio (0,44 g ± 0,003 g) secado en estufa ( °C??) Ácido sulfúrico (5 ml ± 0,2 ml) a 1000 ml con agua desionizada SOLUCIONES DE REFERENCIA COMERCIALES CONCENTRACIÓN CONOCIDA CERTIFICADAS TRAZABLES (NIST) Ej: 1000 µg/ml PO4(3-) (±2 µg- 20 ºC)

11 Reactivos (5) SOLUCIONES DE CALIBRACIÓN (TIPO)
Norma IRAM-SAGPyA Reactivos (5) SOLUCIONES DE CALIBRACIÓN (TIPO) Mínimo 5 soluciones Entre 0 y 7 µg/ml de P A partir de la Solución de Referencia Con solución extractora

12 Instrumental (6) Norma IRAM-SAGPyA 29570-1
Material de vidrio uso habitual (limpio, seco, libre de P) Agitador de vaivén regulable 180 gpm Balanza analítica Balanza presición 0,01 g Centrífuga Dosificadores Espectrofotómetro Medidor de pH Papel de Filtro (libre de fosfato) Tubos de centrífuga 50 ml con tapa

13 Ambientes ventilados Temperaturas 20 a 25 ºC
Norma IRAM-SAGPyA Condiciones de Trabajo (7) Ambientes ventilados Temperaturas 20 a 25 ºC

14 Preparación de la muestra (8)
Norma IRAM-SAGPyA Preparación de la muestra (8) IRAM-SAGPyA (Pretratamiento muestras de suelo de uso agropecuario...) Porción representativa Secada Tamizada 2 mm

15 Procedimiento (9) Extracción (9.1)
Norma IRAM-SAGPyA Procedimiento (9) Extracción (9.1) Relación Suelo: Solución 1:7 (m/V). Peso: 2 g ± 0,1 g muestra en tubo centrífuga (50 ml. c/tapa). Agregar 14 ml ± 0,5 ml solución extractora. Agitar en el sentido del vaivén 5 minutos. Paralelamente desarrollar ensayo en blanco.

16 Procedimiento (9) Extracción (9.1)
Norma IRAM-SAGPyA Procedimiento (9) Extracción (9.1) NOTA 1: Se obtienen valores de P extraíble comparables: 2,5 g suelo. Tamizado por 0,5 mm. Tubos de 50 ml fondo no cónico. 20 ml solución extractora Relación 1:8 (m/V). Tubos en posición vertical 5 minutos

17 Procedimiento (9) Cuantificación (9.2)
Norma IRAM-SAGPyA Procedimiento (9) Cuantificación (9.2) Alícuota del extracto de muestra: 1 ml ± 0,02 ml Colocar en tubo de ensayo. Agregar 9 ml ± 0,2 ml solución reactiva B. Homogeneizar. Esperar mínimo 30 minutos para desarrollo de color (el complejo color azul es estable por 24 hs.) Leer absorbancia en espectrofotómetro 882 nm (se puede emplear 720 nm aceptando pérdida de sensibilidad y verificando linealidad)

18 Procedimiento (9) Cálculo (9.3)
Norma IRAM-SAGPyA Procedimiento (9) Cálculo (9.3) Gráfica y analíticamente a partir de la curva de regresión Ecuación: P (µg/g o ppm)= (P alíc(µg) x V ext x F) / (m x Valíc) Ej: P (µg/g)= P(µg) x 14 ml x 1 / (2 g x 1 ml) P (µg/g)= P x 7 µg/g F: Factor de dilución: debe diluirse el extracto original y repetir el procedimiento, si la absorbancia de la muestra es mayor que la lectura de la solución de calibración de mayor concentración

19 Cálculo: Regresión lineal

20 Cálculo: Regresión lineal

21 Encuesta sobre detalles metodológicos Análisis de los resultados
Método Bray Kurtz 1 Análisis de los resultados

22 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos PARTICIPANTES N° laboratorios participantes PROINSA 2010: 69 N° laboratorios que respondieron la encuesta: 36

23 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 1- Metodología utilizada IRAM SAGPyA lab (58%) SAMLA lab (3%) PROMAR lab (3%) Bray Kurtz (no aclaran) lab (33%) Otro: OLSEN lab (3%) No se considerará el laboratorio que utiliza Olsen por tratarse de otro método de extracción Total laboratorios considerados: 35

24 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 2- Secado de la muestra Al aire lab (43%) En estufa (T° menor a 40 °C) lab (57%)

25 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 3- Tamizado de la muestra 2 mm lab (86%) 5 mm lab (14%)

26 Relación 1:7...... 23 lab (66%) Relación 1:8...... 12 lab (34%)
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 4- Relación Suelo: Extractiva Relación 1: lab (66%) Relación 1: lab (34%)

27 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 5- Recipientes Tubos falcon 40–50 ml lab (71%) Tubos falcon 10–15 ml lab (9%) Recipientes ml lab (9%) Vaso ppdo ml lab (6%) Erlenmeyer lab (3%) Tubo rollo fotos lab (3%)

28 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 6- Extractante: control del pH FlNH4 0,03 N + HCl 0,025 N Ajusta pH a 2, lab (74%) No controlan el pH lab (26%)

29 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 6- Extractante: control de temperatura Controlan la temperatura lab (54%) No controlan la T° lab (43%) No contestan lab (3%)

30 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 7- Tiempo de extracción 5 minutos lab (91%) 1 minutos lab (3%) 6 minutos lab (3%) No contestan lab (3%)

31 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 8- Agitación Vaivén 180 gpm lab (83%) Rotativo / Orbital gpm... 4 lab (11%) Magnético lab (3%) Vertical lab (3%)

32 Centrifugado...... 22 lab (63%) Filtrado.................13 lab (37%)
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 9- Separación del extracto Centrifugado lab (63%) Filtrado lab (37%)

33 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 10- Colorimetría

34 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 11- Solución colorimétrica

35 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 12- Tiempo desarrollo color

36 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 13- Tiempo máximo de medición

37 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 14- Solución de Referencia

38 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 15- Soluciones de trabajo (Tipo)

39 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 16- Equipo de medición Espectrofotómetro lab (89%) Fotocolorímetro lab (9%) Fotómetro lab (3%)

40 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelos 17- Longitud de onda de medición

41 Metodología Fósforo Extraíble en Suelo
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelo CONSIDERACIONES SOLUCIONES DE CALIBRACIÓN (TIPO): La norma pide AL MENOS 5 puntos de calibración. Cuando la solución de referencia es de PO4(3-), hacer la conversión a P. Cuando la solución más concentrada tiene baja concentración (ej. 3 mg P/L), si la absorbancia de la muestra supera el valor de ésta, deberá diluirse la muestra. Para verificar linealidad, algunos métodos estadísticos piden puntos de calibración equidistantes.

42 Metodología Fósforo Extraíble en Suelo
Encuesta PROINSA 2010 Metodología Fósforo Extraíble en Suelo CONSIDERACIONES MUESTRA DE SUELO COMO PATRÓN INTERNO: Un patrón interno de suelos permite hacer el seguimiento de toda la metodología (desde la extracción), permitiendo detectar errores en cualquier parte del proceso. El uso de “CARTAS DE CONTROL” es una herramienta fundamental para el control de la calidad analítica de las mediciones. SUGERENCIA: utilizar el sobrante de muestra de los interlaboratorios como patrones internos.

43 ¡Muchas Gracias !