BIBLIOGRAFIA Griffiths et al. (2000) Klug y Cummings (1999) CAPITULO 16 TECNOLOGIA DEL DNA RECOMBINANTE II. Polimorfismo Genético a nivel del DNA BIBLIOGRAFIA Griffiths et al. (2000) Klug y Cummings (1999) Tamarin (1999) Strachan et al. (1996) Kaplan et al. (1993) wwwhttp://www.cbs.dtu.dk/dave/roanoke/genetics.html Pilar Zaragoza
POLIMORFISMO GENETICO Existencia de distintos alelos POLIMORFISMO POLIMORFISMOS DEL DNA BIOQUIMICO Variaciones presentes en la Detección de secuencia de bases variación a nivel del producto del gen: proteínas y enzimas
Clasificación del DNA eucariótico GENES DE COPIA UNICA Codifican genes de proteínas estructurales generalmente exones: MARCADORES DE TIPO I DNA REPETIDO : MARCADORES DE TIPO II SEC. FUNCIONALES Familias de genes que cifran productos Familia de genes dispersos: Actinas, Miosina, Familia de genes en tandem:Org.nucleolaar Sec. Funcio. que no cifran productos: Tel. SEC. SIN FUNCION CONOCIDA Rep. de heterocromatina centromérica VNTRs, microsatélites, PoliA Secuencias derivadas de trasposición (trasposones,elm. Retrotrasponibles, retrovirus): SINES, LINES DNA SEPARADOR (el resto no identificado)
Detección por: SOUTHERN BLOT PCR POLIMORFISMOS A NIVEL DEL DNA MARCADORES DE TIPO I POLIMORFISMOS DE LA LONGITUD DE LOS FRAGMENTOS DE RESTRICCION RFLPS Detección por: SOUTHERN BLOT PCR
MINISATELITES (VNTRs) MICROSATELISES (STRs) SINES, LINES POLIMORFISMOS A NIVEL DEL DNA MARCADORES DE TIPO II POLIMORFISMOS BASADOS EN EL NUMERO DE SECUENCIAS REPETIDAS EN TAMDEN: “ Satélites del DNA” MACROSATELITS MIDISATELITES MINISATELITES (VNTRs) MICROSATELISES (STRs) SINES, LINES
POLIMORFISMOS A NIVEL DEL DNA MARCADORES DE TIPO II POLIMORFISMOS BASADOS EN MUTACIONES QUE NO ORIGINAN CORTES POR E.R. OTROS MARCADORES SSCPs ASO ACRS RAPs ESTs STSs
RFLPs Origen: mutaciones delecciones insercciones reordenaciones Detección Enz. Rest. Baja variabilidad: exones DNA de copía única Detección por PCR y Southern
SATELITES DEL DNA ___________________________________________ TAMAÑO UNID. METODO (Kb) REPETI. DETECC. MACROSATELITS 100-500 20 Kb Centr.ClCe MIDISATELITES 200-500 40 bp Elec.Cam.Pulsa. MINISATELITES varias 20-40bp Elec. agarosa MICROSATELISES bp 20-30rep Elec. acrilamid de 1 a 4 nucleótidos ____________________________________________________
4 5 7 9 10 11 8 6 INDIVIDUO 1 1’ 3’ 1 INDIVIDUO 2 3’ 2’ 2’ INDIVIDUO 1 VNTRs Región del genoma que contiene una secuencia central o “core” que se repite un número variable de veces Alta variabilidad: intrones DNA repetido Detección por E.R y Southern 4 5 7 9 10 11 8 6 INDIVIDUO 1 INDIVIDUO 2 INDIVIDUO 1 2 4 6 8 1 3 5 7 9 1’ 1 3 2 4 3’ 1 3 5 7 2 4 6 8 1 10 4 6 8 INDIVIDUO 2 11 7 3 5 2 3’ 9 1 3 5 2 4 6 7 2’ 1 3 5 7 9 2 4 2’ 10 6 8
VNTRs
FINGERPRINTS O HUELLAS DNA
ESTUDIOS DE BIODIVERSIDAD
FUNCIONES DE VNTRs -Regulación de puntos activos de recombinación -Control de segregación crs. ( por su localización centromérica) - Estabilización crs durante la replicación ( por su localización telomérica) - Parece que dan estabilidad a los crs.
MICROSATELITES DEL DNA STRs Secuencias del genoma localizadas normalmente en intrones, que consisten en repeticiones de uno, dos, tres o cuatro nucleótidos. CARACTERISTICAS: -Su polimorfismo radica en el número de repeticiones - Herencia mendeliana codominante - Altamente polimórficos ( nº medio de alelos 10) - se han encontrado en todas las especies conocidas - muy numerosos y bien distribuidos por el genoma (cada gen al menos un microsatélite) - Visualización del polimorfismo por PCR y electroforesis en gel de poliacrilamida
SSCPs
RAPDs