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Publicada porMaría Antonia Ruiz Arroyo Modificado hace 8 años
1
TECNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR IES JOAQUÍN TURINA SEVILLA
2
ENDONUCLEASAS O ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Generan cortes internos en la molécula de ADN Pueden generar extremos romos o cohesivos
3
Enzimas de Restricción
4
Extremos cohesivos
6
Extremos romos
8
Clonación y uso de enzimas
11
Separación de fragmentos Geles de Agarosa Geles de poliacrilamida
13
CLONACIÓN
15
PCR ( reacción en cadena de polimerasa) Componentes de la reacción Polimerasa Primers dNTP’s Cloruro de magnesio Agua Buffer
29
SOUTHERN BLOT
30
1) Blood sample. 2) DNA is extracted from blood cells. 3) DNA is cut into fragments by a restriction enzyme. 4) The DNA fragments are separated into bands during electrophoresis in an agarose gel. 5) The DNA band pattern in the gel is transferred to a nylon membrane. 6) Radioactive DNA probe, designed to recognise specific DNA sequences, is prepared. 7) Probe DNA binds to the specific DNA sequences on the membrane. 8) Excess DNA is washed off, but the DNA pattern is invisible at this stage. 9) X-ray film is placed next to the membrane & exposed to the radioactive DNA. 10) The developed X-ray shows the pattern of DNA bands
36
SECUENCIACIÓN
44
VNTR
49
DNA fingerprinting
50
CLONACIÓN EN ANIMALES
51
COPY-CAT (EE.UU 2002)
52
PAMPA (Argentina 2002)
53
PROMETEA (Italia 2003)
54
Ian Wilmut and Dolly. In 1996, British embryologist Professor Ian Wilmut created, the world's first sheep cloned from an adult sheep cell. The research was conducted at the Roslin Institute in Edinburgh, Scotland.
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Marcadores moleculares Y sus aplicaciones
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Tipos de Marcadores Directos o sea dentro del gen (intragénicos) Indirectos usando a otro gen o marcador cercano en el cromosoma para poder identificar sus diferencias entre individuos
57
RFLP’s Pueden hacerse por Southern blot Pueden hacerse por PCR
58
Utilidad Detección de individuos portadores de un gen recesivo. Test de paternidad o trazabilidad. Selección asistida por marcadores, Salud publica, Virología, etc
59
Por Southern blot
61
Por PCR y luego restricción
63
VNTRs o microsatélites Pueden hacerse por Southern blot Por PCR y geles de poliacrilamida o agarosa Por SSCP
71
Cepas diferentes de Salmonellas
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