IDENTIFICACIÓN DE GENOMAS VIRALES
AMPLIFICACIÓN DEL ÁCIDO NUCLEICO - PCR http://www.cienciahoy.org.ar/hoy23/reaccion.htm 94 ºC DESNATURALIZACIÓN DEL ADN 5´ 3´ 5´ 3´ 3´ 55-60 ºC ADHESIÓN DE LOS PRIMERS 5´ 3´ 5´ 5´ 3´ 72 ºC EXTENSIÓN (La Taq. polimerasa agrega nucleótidos) 3´ 5´ 5´ 3´ http://www.youtube.com/watch?v=Kuy4PDb6bdU 3´ 5´
TERMOCICLADOR AQUÍ SE REALIZAN LOS 3 PASOS DE AMPLIFICACIÓN DEL DNA: 1.- DESNATURALIZACIÓN DEL DNA 2.- PEGADO DE LOS PRIMERS 3.- EXTENSIÓN DE LAS CADENAS DE DNA ESTE PROCESO SE REPITE 30 A 40 VECES
ARMADO DEL GEL DE AGAROSA PARA VISUALIZACIÓN POR ELECTROFORESIS DE LOS PRODUCTOS DE LA PCR http://www.youtube.com/watch?v=SahgDkDSutk Agregado de Bromuro de etidio en el gel
Siembra de las muestras Se cubre el gel con buffer de corrida Siembra de las muestras
Lectura en el transiluminador
TECNICAS DE BLOTEO o TRANSFERENCIA: Southern blot http://www.nucleomilenio-emba.cl/index.php?option=com_content&view=article&id=43:tecnica-southern-blot&catid=9:tecnicas-moleculares Northern blot http://www.youtube.com/watch?v=KfHZFyADnNg Western blot http://www.youtube.com/watch?v=nqspgMGNsrU http://www.youtube.com/watch?v=zYSPnSwT6LQ Papel absorbente Membrana de nylon gel Papel absorbente Membrana de nylon Hibridación con sondas marcadas (ácidos nucleicos) Agregado de anticuerpos marcados (proteínas) Las bandas que aparecen corresponden al ácido nucleico o a las proteínas buscadas