Herramientas de la Biología Molecular Material gráfico Secc.Genética Fac. de Ciencias
Técnicas de manipulación genética Aislamiento Amplificación Secuenciación Expresión DE GENES
Los primeros avances 1965 - Arber y col. Enzimas de restricción 1969 - Berg. Trabajo con el virus SV40: posibilidad de integrar un fragmento de ADN al genoma de una bacteria (ADN recombinante!) 1973 - Cohen y Boyer. Primer plásmido recombinante (un gen de anfibio) 1975 - Moratoria. Conferencia de Asilomar
BASES FÍSICAS DE LA HERENCIA: CROMATINA Y CROMOSOMAS REPLICARSE CONTROLAR LA EXPRESIÓN DEL RASGO DE CAMBIAR (POR MUTACIÓN
ENZIMAS DE RESTRICCION 1965 - Arber y col. 1978 - Smith y Nathan . Premio Nobel Enzima de tipo II. Ej: Eco RI (E.coli cepa RY13) Reconocimiento y corte: GAATTC CTTAAG ----G ---AATTC--- ----CTTAA G---
Los vectores Llevan un ADN foráneo son capaces de ingresar a una célula y replicarse dentro de ella
Plásmidos * ADN circular extracromosómico * Se replican autónomamente, utilizando enzimas de la bacteria * No.copias/bacteria: 1 a 3000 * Tamaño pequeño (3 kb) * Inmóviles
Como vectores * Marcadores * sitio de policlonaje * segmento del operón lac para una región de la beta glactosidasa * Capacidad 15 kb
Obtención de ADN en cantidad
Tipos de ADN a clonar ADN complementario ADN sintético ADN genómico
GENOTECA: clonado de un juego completo del genoma de una especie SONDA: ácido nucleico marcado cuya complementariedad localiza una secuencia determinada
Biblioteca genómica
Otros vectores en procariotas * Bacteriófagos. Fago lambda ADN doble cadena de 48,5 kb, con extremos que le permiten circularizarse permiten insertos más grandes * Cósmidos: plásmidos con regiones cos de fagos insertos de 40-45 kb
CROMOSOMAS Y CARIOTIPOS 2n = 46 (XX/XY) Cromosomas de tipo metacéntricos submetacéntricos y acrocéntricos. Metafase mitótica humana. Técnica standard, tinción con giemsa
Podemos conocer la secuencia
Electroforesis
Cómo se observa tras la electroforesis
Ensayo de Southern blot
PCR Reacción en cadena de la polimerasa Emplea cebadores específicos Utiliza una polimerasa resistente al calor (Taq) Amplifica exponencialmente una secuencia determinada
Los glóbulos rojos
ANEMIA FALCIFORME
El fenotipo a nivel molecular Resultado de la electroforesis
La molécula de hemoglobina
La base molecular de la anemia falciforme CROMOSOMA 11 GGTCTCCTC El gen ocupa un lugar (LOCUS) en el cromosoma. G G T C T C C C C A G A G G CAC GTG