Técnica de Cultivo de tejidos in vitro

Palabras clave ctv (cultivo de tejidos in vitro) Explanto Totipotencialidad Medio de cultivo Macronutrientes Micronutrientes Asepsia Micro propagación

Algunas definiciones Expresión utilizada para describir la técnica que busca cultivar in vitro (en vidrio) cualquier parte viva de una planta colocada sobre un medio de nutritivo artificial, bajo condiciones controladas

Cultivo aséptico in vitro de cualquier parte de una planta en un medio nutritivo. Tipos de cultivos: cultivo de células cultivo de tejidos cultivos de órganos

Pierik (1987) define cultivo in vitro de plantas superiores como: El cultivo en medio nutritivo, bajo condiciones estériles, de plantas, semillas, embriones, órganos, explantos, tejidos, células y protoplastos de plantas superiores

EXPLANTO    Con el término explanto se describe un fragmento cortado de un tejido o de un órgano utilizado para iniciar un cultivo.   Como explanto puede ser utilizado casi cualquier órgano o tejido, pero para la micropropagación es más conveniente partir de una yema o ápice meristemático que garantice la estabilidad genética de sus células.

¿Qué partes de la planta son más utilizadas? Semillas Meristemos Microestacas Hojas Porciones de raíz principal Callo

¿Qué es un meristemo? Los tejidos meristemáticos son los responsables del crecimiento vegetal. Sus células son pequeñas, tienen forma poliédrica, paredes finas y vacuolas pequeñas y abundantes. Se caracteriza por mantenerse siempre joven y poco diferenciado. Tienen capacidad de división y de estas células aparecen los demás tejidos. Lo cual diferencia los vegetales de los animales que llegaron a la multicelularidad de una forma completamente diferente.

Tipos de cultivo in vitro

que infraestructura es necesaria? 1.Sala de preparación de medios de cultivo: Área de lavado Estantería para almacenamiento Reactivos Instrumental. Balanza analítica Vidriería

2.Sala de siembra Cámara de flujo laminar Lámpara de luz ultravioleta Ropa adecuada

CAMARA DE FLUJO LAMINAR

3.Sala de incubación Control de temperatura Intensidad luminosa Fotoperíodo Aire acondicionado Adecuar áreas de oscuridad

Ventajas de la técnica de CTV Producción de gran número de plantas. Obtención de plantas en cualquier época del año. Almacenamiento de plantas en poco espacio. Producción de plantas libres de contaminación Fitomejoramiento: plantas de alta calidad Producción comercial rentable

Desventajas de la técnica in vitro No todas las especies son viables in vitro Cada especie requiere de métodos específicos La estandarización de protocolos resulta costosa La clonación puede producir empobrecimiento genético de las especies

¿Cuando se justifica usar la técnica? Plantas de alto costo, especies raras, escasas, en vía de extinción. Especies de propagación lenta o deficiente en condiciones naturales. Poca viabilidad de las semillas. Cultivos comerciales de alto valor económico: flores y plantas ornamentales. Cuando se desea disponer de plantas todo el año. Para producir poblaciones genéticamente uniformes.

Medio de cultivo El medio de cultivo es la combinación sólida o líquida de nutrientes y agua que hace las veces del medio natural (suelo), donde la planta crecería en condiciones normales

Composición medio de cultivo Necesidades nutricionales y hormonales de los cultivos de órganos y tejidos vegetales Agua Sustancias orgánicas Macro Micro elementos Azúcares Aminoácidos Auxinas Citoquininas Giberelinas Acido abcísico Agar agar o gelatina (soporte) N P K Ca Mg S Fe Zn B Mn Cu Ni Co Al Mo I

Preparación del medio de cultivo

Iniciación proceso in vitro

Micro propagación

Iniciación proceso ex vitro

Terminación del ciclo

FASE 1

FASE II. MULTIPLICACIÓN DE LOS BROTES Durante esta fase se espera que los explantos que sobrevivieron de la FASE I originen brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varios entrenudos. Periódicamente estos nuevos brotes se deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y resiembras en tubos de cultivo u otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan en la cámara de flujo laminar.

FASE II

Visión general de la técnica in vitro

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