Análisis por electroforesis en geles de poliacrilamida de fracciones obtenidas durante la purificación por cromatografía de intercambio iónico. Marcador.

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Transcripción de la presentación:

Análisis por electroforesis en geles de poliacrilamida de fracciones obtenidas durante la purificación por cromatografía de intercambio iónico. Marcador o Estándar de Peso Molecular (valores en kiloDaltons) 225 kDa 150 100 75 50 (banda de mayor intensidad, señalada con una flecha) 35 25 15 10

GRUPO 3 - Gel NO Denaturante (al 12% ) Marcador Estándar Extracto crudo – 2.5 uL Extracto crudo – 3 uL Extracto crudo – 5 uL Tubo 3a (buffer sin NaCl) –fracción original. Tubo 4c (0.5mM NaCl) -–fracción original. Tubo 1d (1 mM NaCl) -–fracción original. Tubo 4b (0.25 mM NaCl)-precipit. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) –precipit. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) – precipit. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 50 kDa

GRUPO 3 - Gel denaturante (al 12% ) Marcador Estándar Extracto crudo – 2.5 uL Extracto crudo – 3 uL Extracto crudo – 5 uL Tubo 3a (en buffer fosfato) Tubo 4c (0.5mM NaCl) Tubo 1d (1 mM NaCl) Tubo 4b (0.25 mM NaCl)-precipit. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) –precipit. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) – precipit. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 50 kDa

GRUPO 2 - Gel denaturante (al 15% ) NOTA : UTILIZAR ESTE GEL PARA HACER EL GRAFICO Y DETERMINAR EL PESO DE LA PIRAZINAMIDASA GRUPO 2 - Gel denaturante (al 15% ) Inicio de gel Tubo 2d (1 mM NaCl) - precipitado Tubo 1d (1 mM NaCl) – fracción original Tubo 1d (1 mM NaCl)- precipit. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) -precipitado Tubo 4c (0.5 mM NaCl) -fracción original Tubo 4c (0.5mM NaCl) - precipitado Tubo 5b (0.25 mM NaCl) – precipitado Marcador Estándar Tubo 4a (buffer sin NaCl) –fracción original Extracto crudo – 2.5 uL 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Pirazinamidasa 50 kDa Frente de corrida NOTA : Los datos de migración están en el último slide

GRUPO 2 - Gel NO Denaturante (al 12% ) Tubo 2d (1 mM NaCl) - precipitado Tubo 1d (1 mM NaCl) – fracción original Tubo 1d (1 mM NaCl)- precipit. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) -precipitado Tubo 4c (0.5 mM NaCl) -fracción original Tubo 4c (0.5mM NaCl) - precipitado Tubo 5b (0.25 mM NaCl) – precipitado Tubo 4a (buffer sin NaCl) –fracción original Extracto crudo – 2.5 uL Marcador Estándar 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 50 kDa Pirazinamidasa??? Cree usted que se pueda tomar el tamaño calculado a partir de este tipo de gel como un dato preciso?

Datos de migración del Gel denaturante (al 15% ) del Grupo 2 Migración (cm) y Pesos Moleculares (kDa) 0,2 - 225 kDa 0,3 - 150 0,48 - 100 0,65 - 75 1 - 50 (banda de mayor intensidad, señalada con una flecha) 1,4 - 35 1,9 - 25 3 - 15 3,6 - 10 4,6 - frente de corrida 2,3 - Pirazinamidasa (carril 2)