VALIDACION DE METODOS ANALITICOS

MEDICIONES ANALITICAS VALIDAS Las mediciones analíticas deben ser realizadas para satisfacer requerimientos preestablecidos. Las mediciones analíticas deben ser realizadas utilizando métodos y equipos que hayan sido verificados de tal manera que aseguren que son adecuados a su propósito. El personal que realiza las mediciones analíticas debe ser calificado y competente para asumir esta tarea.

MEDICIONES ANALITICAS VALIDAS En forma regular, debe existir una evaluación independiente del desempeño técnico del laboratorio Las medidas analíticas realizadas en un laboratorio deben ser consistentes con las que se realizan en otros laboratorios. Las instituciones que realizan medidas analíticas deben tener procedimientos de control y aseguramiento de calidad bien definidos.

ASPECTOS DE LA VALIDACION DE METODOS Especificaciones analíticas. Evaluación de su exactitud. Evaluación de su precisión (Repetibilidad y Reproducibilidad). Evaluación de incertidumbre. Sensibilidad. Especificidad Robustez.

ASPECTOS DE LA VALIDACION DE METODOS Rango de concentraciones de trabajo y rango de linealidad. Límite de detección. Límite de cuantificación. Ensayos de recuperación. Grado de validación necesario según objetivos.

EVALUACION DE PRECISION Y EXACTITUD DE UN METODO ANALITICO ESPECIFICACIONES ANALÍTICAS: Los límites aceptables de exactitud y precisión están determinadas por los requerimientos de los resultados a obtener a través de dicho método. LÍMITES LEGALES SISTEMAS DE ACREDITACIÓN USUARIO DE LAS MEDICIONES EXPERIENCIA PREVIA

SELECCIÓN DEL MRC Nivel Matriz Cantidad Estabilidad Incertidumbre aceptable del MRC

EXACTITUD DEL METODO Esta propiedad se obtiene por comparación del valor promedio obtenido y el valor certificado , del MRC Existen tres factores que contribuyen a la diferencia anterior: El error (incertidumbre) del valor certificado. El error de los resultados del proceso de medición que está siendo evaluado, expresado como su desviación estándar d. El error sistemático global que el laboratorio puede estar cometiendo.

CRITERIO DE ACEPTACION DE EXACTITUD El criterio de aceptación de exactitud está dado por la siguiente expresión: LAB =  x -   < ( t0.05  sw / n ) + U =  crítico Se acepta cuando LAB <  crítico Para realizar esta prueba estadística, es necesario tener alguna información previa: El valor de U, del MRC Un valor estimado de la precisión del método. ¿Cual es la magnitud del sesgo que se quiere detectar? ¿Cual es el número “n” de mediciones replicadas que es necesario realizar?

CRITERIO DE ACEPTACION DE EXACTITUD Para ilustrar el uso del criterio anterior, veamos un ejemplo tomado de un estudio de intercomparación (As) previo : Un laboratorio participante realizó tres mediciones replicadas de un MRC obteniendo un valor promedio de 40,2 g/L con una desviación estándar de 0.49 g/L. El MRC tenía un valor certificado de 41,7 g/L y U= 0.5 g/L Entonces lab = | 40,2 - 41,7 | = 1,5 crítico =(t0.05; df=2  SD /  n) + U = (4,303  0,49 /  3) + 0,5 = 1,72 En consecuencia “pasa” la prueba de sesgo

CRITERIO DE ACEPTACION DE EXACTITUD Supongamos ahora que el mismo laboratorio realiza 9 determinaciones replicadas obteniendo el mismo valor promedio, con una desviación estándar menor e igual a 0, 31 g/L. El valor de lab es el mismo: 1,5 Ahora, crítico es = (2,306  0,31/  9) + 0,5 = 0,74 En consecuencia NO “pasa” la prueba de sesgo. ¿ QUE ES LO QUE OCURRE?

CRITERIO DE ACEPTACION DE EXACTITUD Lo que nos faltó es una pregunta previa muy importante: ¿ Cual es la magnitud de sesgo que necesitamos detectar, de acuerdo a lo que es requerido?

CRITERIO DE ACEPTACION DE EXACTITUD Supongamos que por requerimiento regulatorio, o para “aprobar” un requerimiento de desempeño por parte de un organismo regulador es aceptable un sesgo máximo del 5% relativo, en el rango de concentraciones 40 - 50 g/L. El laboratorio sabe que su precisión al usar este método es del orden del 2% relativo o Coeficiente de Variación. Usamos la Tabla 1 (ver Informe). Con  y  = 0,05, para d = d /  = 5% / 2% = 2,5  N = 3

CRITERIO DE ACEPTACION DE EXACTITUD Si, en cambio, este laboratorio tuviera (típicamente) un Coeficiente de Variación del 5% relativo, tendríamos que para poder detectar un sesgo del 5%: d = 5% / 5% = 1 y entonces de la Tabla 1 encontramos para  y  = 0,05 que N = 13

FUENTES DE SESGO Control de las variables de medición Interferencias Calibraciones erróneas Contaminación Pérdidas Deterioro de las muestras Ineficiencias en las extracciones o disolución de las muestras Blancos incorrectamente evaluados o no tomados en cuenta.

PRECISION DEL METODO Número de determinaciones replicadas Mediciones independientes

EVALUACION DE LA PRECISION El control de la precisión del método implica la comparación entre la precisión (desviación estándar intralaboratorio) bajo condiciones de repetibilidad y el valor requerido de desviación estándar. Realizar las “n” mediciones independientes (previamente determinadas) sobre las muestras del MRC. Calcular, de la manera habitual el valor promedio y la desviación estándar (sw ), bajo condiciones de repetibilidad.

CALCULO DE LA PRECISION DONDE r ES LA PRECISION REQUERIDA A PARTIR DE UNA TABLA DE 2 OBTENER EL VALOR CRÍTICO 2TABLA PARA 95% DE SIGNIFICACIÓN, PARA n-1 GRADOS DE LIBERTAD Y DIVIDIR POR N - 1. LA DECISIÓN ES: a) SI 2 < 2TABLA NO HAY EVIDENCIA QUE EL PROCESO DE MEDICIÓN NO SEA TAN PRECISO COMO ES REQUERIDO. b) SI 2 > 2TABLA HAY EVIDENCIA DE QUE EL PROCESO DE MEDICIÓN NO ES TAN PRECISO COMO ES REQUERIDO.

OBTENCION DE d Utilizar la desviación estándar de reproducibilidad obtenida en un ensayo interlaboratorios. Si este valor no está disponible, se puede utilizar la reproducibilidad intra-laboratorio, obtenida de un gráfico de control para el método en estudio También podría usarse el valor de precisión suministrado por el certificado del MRC.

EJEMPLO . Objetivo: Evaluar si cierto método analítico (método A) es suficientemente preciso, utilizando un MRC de hierro en minerales. Información del certificado del MRC:  = 60.73% Fe D = 0.20% Fe R (requerido) = 0.09% Fe

EJEMPLO Después de reexaminar el procedimiento se mejoraron las condiciones del ataque ácido inicial y se repitió la evaluación anterior. Ahora la precision del metodo “A revisado” es tambien la requerida SE OBTUVO UN VALOR PROMEDIO DE 61.087% Fe, CON UNA DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE 0.092% Fe. - x -  = 61.087 – 60.730 = 0.357% Fe 2 D = 0.40% Fe x -   < 2 D POR LO TANTO, EL MÉTODO ES TAN EXACTO COMO ES REQUERIDO.

EVALUACION DE UN PROCESO DE MEDICION A TRAVES DE UN PROGRAMA INTERLABORATORIO Establecer un número k de laboratorios participantes y el número n de mediciones replicadas que se efectuarán sobre un MRC adecuado al propósito del ensayo. Establecer los procedimientos técnicos y administrativos, por medio de los cuales la institución organizadora, coordinará el programa. Evaluación de la precisión: la precisión del método se expresa en términos de sw, que es la estimación de precisión intralaboratorio, y slm, que es la estimación de precisión interlaboratorios. La precisión intralaboratorio se determina de la misma manera que la descrita anteriormente. La precisión interlaboratorios puede ser determinada a través de un prueba estadística:

El siguiente concepto debe ser tomado como un axioma: CONTROL ESTADISTICO El siguiente concepto debe ser tomado como un axioma: “El primer objetivo de un proceso de medición en el laboratorio debe ser alcanzar su control estadístico”

Rango (n=2) (mmol/L)

CONTROL ESTADISTICO Donde Rprom es el promedio de un conjunto de, por lo menos, 15 medidas por duplicado. LSP es el límite superior de precaución, igual a 2.512 Rprom LSC es el límite superior de control igual a 3.267 Rprom