Electroforesis en gel de ADN Tema 4.4.2 y 4.4.3.
¿Qué es la electroforesis? La electroforesis en gel es una técnica sencilla empleada de forma rutinaria en laboratorios para separar moléculas biológicas especialmente ADN, ARN y proteínas.
Procedimiento: La electroforesis en gel permite separar ácidos nucleicos o proteínas a lo largo de un campo eléctrico, en función de su tamaño y de su carga eléctrica. Las moléculas de ADN y ARN, tienen por naturaleza carga negativa. Si ponemos fragmentos del ADN extraído de una muestra biológica sobre un soporte poroso (gel) y aplicamos un campo eléctrico, se producirá la migración diferencial de los fragmentos a través de los poros de la matriz.
La tinción del gel con bromuro de etidio, que es una sustancia fluorescente que se intercala en la molécula de ADN, y la exposición con luz ultravioleta, permite observar el resultado de ésta migración. El tamaño de los fragmentos de ADN se puede estimar comparándolos con una escala patrón de bandas.
Utilidad: La electroforesis de ADN es útil para comparar patrones de bandas de diferentes muestras biológicas. Así por ejemplo se puede usar para: comparar muestras de individuo sano frente a individuo enfermo la investigación forense al momento de identificar sospechosos en escenas de crimen para realizar exámenes de paternidad.
Resumen: ELECTROFORESIS Se separan las proteínas o los ácidos nucleicos en un gel de electroforesis, con los ácidos nucleicos se utiliza un gel de agarosa. Muestra de ADN fragmentado se coloca en uno de los pozos en el gel. Una corriente eléctrica pasa a través del gel. Fragmento de separación se basa en la carga y tamaño. Fragmentos grandes se mueven lentamente. Fragmentos negativos se mueven hacia la derecha.
Imagen microscópica de los fragmentos de ADN luego de ser teñidos
Esquema del proceso de electroforesis en gel
Video http://www.medmol.es/tecnicas/68/ http://www.youtube.com/watch?v=eauONOJ3F00&NR=1