Detección de productos PCR por Electroforesis en Gel de Agarosa DNA-Fingerprint 1
1. Preparación de la cámara Gel DNA-Fingerprint 2
1. Preparación de la cámara de Gel 1.1 Añadir 1g de Agarosa a 33 ml TAE- Buffer en un matraz Erlenmeyer de 100ml 1.2 Hervir la mezcla en un microondas, agítala e hiervela de nuevo. 1.3 Deja enfriar la solución de agarosa hasta 55 °C ( test del dorso de la mano)y vierte el gel. DNA-Fingerprint 3
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1. Preparación de la cámara de Gel 1.4 Después de que el gel está sólido, quita las varillas metálicas de la cámara de electroforesis . 1.5 Rellena la cámara de electroforesis con 270 ml TAE-Buffer para cubrir el gel 1.6 Retira el peine! DNA-Fingerprint 5
2. Preparación de las muestras para la Electroforesis en gel DNA-Fingerprint 6
2. Preparación de las muestras para la electroforesis en Gel 2.1 Saca tus 6 tubos de PCR del termociclador! 2.2 Ponlos en sus correspondientes gradillas! DNA-Fingerprint 7
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2. Preparación de muestras para Electroforesis en gel 2.3 Pipetea 10 µl Naranja G descargando el colorante (LD) en cada uno de los 6 tubos con PCR y mézclalos, golpeándo ligeramente el fondo del tubo con tus dedos. DNA-Fingerprint 9
3. Rellenar los pocillos del Gel DNA-Fingerprint 10
3. Rellenar los pocillos del Gel 3.1 Rellena los pocillos del gel de izquierda a derecha con: - 20 µl patrón de pesos moleculares (MWR) - 20 µl –GMO control con PMM (1) - 20 µl –GMO control con GMM (2) - 20 µl muestra de comida(T) con PMM (3) - 20 µl muestra de comida (T) con GMM (4) - 20 µl +GMO-DNA con PMM (5) - 20 µl +GMO-DNA con GMM (6) DNA-Fingerprint 11
4. Corriendo la Electroforesis DNA-Fingerprint 12
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4. Corriendo la Electroforesis 4.1 Cierra la cámara de electroforesis y conéctala a 120 V. 4.2 Detén la electroforesis cuando el colorante Naranja G haya migrado a 1 cm antes del final del gel. DNA-Fingerprint 14
5. Haciendo visibles los fragmentos de DNA DNA-Fingerprint 15
5. Haciendo visibles los fragmentos de ADN 5.1 Abre la cámara de electroforesis saca la placa con el gel. Cuidado con el gel es muy escurridizo! (recoge el TAE buffer, podría utilizarse de nuevo ) 5.2 Transfiere el gel en una bandeja de tinción y añade 70 ml de solución de tinción (50x) agitándolo ligeramente durante 2 minutos DNA-Fingerprint 16
5. Haciendo visibles los fragmentos de ADN 5.3 Quitar la solución de colorante después de dos minutos y desteñir en agua caliente del grifo (40 - 50 °C) agitarlo suavemente por 20 minutes.! Guarda el colorante para un futuro uso DNA-Fingerprint 17
6. Evaluación DNA-Fingerprint 18
6. Evaluación 6.1 Identificar las bandas de ADN en el gel con la ayuda de el patrón de pesos moleculares, con las siguientes longitudes: 100 bp, 200 bp, 500 bp,700 bp, 1000 bp! DNA-Fingerprint 19
6. Evaluación 6.2 Está tu muestra de alimento (T) genéticamente modificado? Prepara una breve charla sobre tus resultados DNA-Fingerprint 20
6. Evaluación 6.2 Está tu muestra de alimento (T) genéticamente modificado? Prepara una breve charla sobre tus resultados DNA-Fingerprint 21