Geles Agarosa Acidos nucleicos Acrilamida Acidos nucleicos Proteinas.

Presentación del tema: "Geles Agarosa Acidos nucleicos Acrilamida Acidos nucleicos Proteinas."— Transcripción de la presentación:

1 Geles Agarosa Acidos nucleicos Acrilamida Acidos nucleicos Proteinas

2 Electroforesis en gel de acrilamida
1. Preparación . Soporte vertical Start at o minutes, run to 2:44

3 Electroforesis en gel de acrilamida
1. Preparación . Acrilamida – Bis acrilamida 10% ml (stock 30%) TBE 1 X………………………………………………. 10 ml (stock 5 X) H20 …………………………………………………… ml Persulfato de amonio (APS) ……………… µl TEMED ………………………………………………. 50 µl Start at o minutes, run to 2:44 Polimerización en alrededor de 20 minutos (depende de la temperatura)

4 Electroforesis en gel de acrilamida
. 2. Preparación de la muestra. 15 ml de DNA (digestión) 4 ml de Loading Buffer Buffer Color Azul de bromofenol, xilencianol, naranja de acrifdina Densidad Glicerol o sacarosa Start at o minutes, run to 2:44

5 Electroforesis en gel de acrilamida
3. Sembrado de la muestra en el gel. Ejemplo: peine de 22 calles Start at o minutes, run to 2:44

6 Electroforesis en gel de acrilamida
3. Sembrado de la muestra en el gel. Start at o minutes, run to 2:44

7 Electroforesis en gel de acrilamida
3. Sembrado de la muestra en el gel. Siembra: 19 ul (15 ul muestra + 4 ul loading buffer) Orden de siembra: L Start at o minutes, run to 2:44 L100 = Ladder de 100 pb

8 Electroforesis en gel de acrilamida
3. Sembrado de la muestra en el gel. L Start at o minutes, run to 2:44

9 Electroforesis en gel de acrilamida
4. Corrida del gel. Aproximadamente V Start at o minutes, run to 2:44

10 Electroforesis en gel de acrilamida
5. Visualización del gel. Tinción con DSView Nuclei Acid Stain (Green fluorescence) Tinción posterior a la corrida (20 minutos en oscuridad) Revelado con luz UV o azul Start at o minutes, run to 2:44