BACTERIOLOGIA OBJETIVO GENERAL Conocer las características macroscòpicas, microscópicas, fisiopatològicas e inmunológicas de los diferentes grupos bacterianos frecuentes en nuestro medio así como las técnicas y procedimientos para identificarlos y caracterizarlos en el laboratorio

OBJETIVOS Reconocer los diferentes tipos de bacterias, que proporcionan elementos que facilitan el diagnostico de la bacteria en una muestra clínica Desarrollar talleres que facilitan la profundización y comprensión de diferentes aspectos de la fisiopatogenia de los microorganismos a estudio. Favorecer la formación integral a través de las diferentes actividades propuestas en el aula y por fuera de esta.

FAMILIA MICROCOCCACEAE GÉNEROS Staphylococcus Micrococos Planococcus Stomatococcus

ESTUDIOS DE HOMOLOGIAS DE ACIDOS NUCLEICOS Micrococcus= Actinomyces Artrobacterias Staphylococcus= Streptococcus Enterococcus Lactobacillus Bacillus

Habitat PIEL MUCOSAS OTROS SITIOS DEL CUERPO NATURALEZA AMBIENTE

AMPLIA DISTRIBUCION Difícil interpretación- Correlación con el cuadro clínico

Bacterias Gram Positivas Aislados con mayor frecuencia de muestra clínicas

Prueba de catalasa positiva

PATOLOGIAS FOLICULITIS FURÙNCULOS ABSCESOS FARINGITIS ENDOCARDITIS ERISIPELA CELULITIS NEUMONIA BACTEREMIA

Planococcus

Especies Planococcus citreus ( 12% Na cl) Planococcus kocuri Planococcus halophilus( exmiembro del gènero) = Micrococcus No han sido implicados en enfermedades humanas.

Micrococcus Ambiente Piel Pigmentos carotenoides Uso industrial: Detección Agentes antimicrobianos en comidas para animales y cosméticos.

Aislamiento OCASIONAL MUESTRAS CON CONTAMINANTES DE LA PIEL , MUCOSAS O AMBIENTES. OPORTUNISTA: sepsis, peritonitis meningitis.

Especies M. luteus únicas especies que se mantienen en el género ARN 16 S M. lylae M. varians M. roseus M. agilis M. kristinae M. nishinomiyaensis M sedentarius M. halobius

Stomatococcus S. mucilaginosus. Coco Gram positivo. Microbiota normal T.R Inmóvil. Encapsulado Catalasa positivo dèbil o negativo. Falta de desarrollo en agar nutritivo con 5% de NaCl. Lo diferencia de los Micrococcus y Staphylococcus.

Infecciones humanas Endocarditis post cateterismo cardiaco Endocarditis en válvulas naturales y protésicas. Sepsis asociada a trauma de cabeza y cuello, quimioterapia del cáncer. Endoftalmitis con posterioridad a implante de cristalino Procesos malignos

Staphylococcus 33 especies 17 encontrados en muestras clínicas. Contacto cercano con animales Staphilococcus capitis: Microbiota normal humana: piel y glándulas sebáceas del cuero cabelludo, frente y cuello. Staphilococcus auricularis: conducto auditivo externo. Staphilococcus hyicus: dermatitis en ganado porcino Staphilococcus intermedius: infecciones en perros ( Infecciones cutáneas), mordeduras por perros. Staphilococcus delphini: delfines Staphilococcus felis: gatos domésticos

HABITAT PIEL MUCOSAS DEL HOMBRE Y ANIMALES SERES HUMANOS INFECTADOS POR CONTACTO FRECUENTE

ENZIMA COAGULASA IDENTIFICA Staphylococcus patògenos. Coagulasa positivo: Staphilococcus aureus Coagulasa negativo: Staphilococcus epidermidis Staphilococcus saprophyticus

Saphylococcus aureus Patógeno humano Ambiente externo Fosas nasales 20 - 40 % adultos. pliegues cutáneos. Perinè Axilas Vagina Microbiota normal oportunista

Staphilococcus aureus

Cocos gram positivos

FACTORES PREDISPONENTES A INFECCIONES GRAVES DEFECTO EN LA DESTRUCCIÒN INTRACELULAR DESPUÈS DE LA FAGOCITOSIS

FACTORES PREDISPONENTES A INFECCIONES GRAVES LESIONES CUTÀNEAS cirugías cuerpos extraños, suturas, catéteres prótesis. infecciones por otros agentes como virus. tumores malignos

FACTORES PREDISPONENTES A INFECCIONES GRAVES administración profiláctica o terapéutica de agentes antimicrobianos

Propiedades Vs enfermedad FACTORES DE VIRULENCIA CAPSULA. Exopolisacarido evitando la fagocitosis Adherencia Inmunotipificaciòn del polisacárido capsular: 8 tipos.

70-80% PERTENECEN AL SEROTIPO CAPSULAR 8 Resistentes a la penicilina serotipo 5

PROTEÌNA A unida a peptidoglicano y se puede segregar al medio interfiere en la ingestión por los leucocitos PMN. fagocitosis Base de las pruebas de aglutinación.

Constituyente de la pared Peptidoglicano Ácidos teicoicos: adherencia a la superficie de las mucosas. Rigidez y estabilidad.

Enzimas CATALASA: inactiva el peroxido de hidrogeno y radicales tòxicos formados por el sistema MIELOPEROXIDASA . COAGULASA: recubre las células bacterianas con fibrina y las hace resistentes a la fagocitosis. FIBROLISINAS: diseminación de la infección a tejidos contiguos. LEUCOCIDINA: lisa granulocitos y macrofagos, compuesta de 2 proteinas termolabiles .

ENZIMAS HIALURONIDASA: hidrólisis de matriz intercelular del muco polisacáridos de los tejidos permite la diseminación del microorganismo. ESTAFILOCINASA: degrada coagulos de fibrina por conversiòn del plasminogeno a la enzima fibrinolitica, plasmina

ENZIMAS LIPASA: degrada acidos grasos protectores de la piel diseminación en tejidos cutáneos y subcutáneos.

TOXINAS ENTEROTOXINAS: responsable de la características clínicas de la intoxicación alimentaría. Mecanismo de acción desconocido Tto de sostén. Flanes ensaladas de papa, carnes procesada helados postres. Diarrea y vomito 2-8 horas

Toxinas Hemolisina, leucocidinas, toxina del síndrome del shock tóxico, toxina epidermolítica y enterotoxinas. Citotoxinas como:` alfa toxina: destruye monocitos y plaquetas (forma anillo polimérico) beta toxina: esfingomielinasa C gamma toxina: hemolítica delta toxina: tipo Detergente

Sindrome de shock tóxico SST Multisistèmica Estafilocóccico: Producción de TSST-1 Cuadro Clínico: Fiebre > 38.9 ºC Eritrodermia difusa Vòmito Diarrea Insuficiencia renal Cefalea Escalofrío Faringitis conjuntivitis Hipotensión arterial Descamación de la piel Sistémica: SNC, hepático, hematológico, muscular o mucosas ELUDIR LOS PASOS DEL PROCESAMIENTO ANTIGENICO

Staphilococcus aureus Infecciones cutáneas benignas hasta enfermedades sistémicas potencialmente fatales.

Infecciones cutáneas Foliculitis simple: Infección Superficial que Rodea Los folículos Pilosos.

INFECCIONES EN LA EPIDERMIS FOLICULITIS Agente Causal: Staphylococcus aureus

INFLAMACIÓN UTER INA BOVINOS Pared uterina : Metritis Serosa o peritoneo visceral : Perimetritis Mucosa : Endometritis Ligamentos extensores : Parametritis Por infección ascendente desde vulva y vagina. Por vía hematógena. Puede causar muerte embrionaria, abortos o acúmulos de pus (piometra). Corynebacterium pyogenes, Staphylococcus, Streptococcus y Escherichia coli. Leves: mucus opaco con el exudado mucopurulento. Moderado: puede necrosis, acumulación de pus y una descarga vulvar de color blanco grisáceo. Los restos de la placenta necrótica dan un medio para la proliferación bacteriana. Macro: congestión, edema y ulceraciones del endometrio, lumen lleno de epitelio descamado, fragmentos placentarios, exudado, líquidos sucios de un color café o pardo y de muy mal olor. Secuelas: absorción de toxinas, trombosis de las venas uterinas, septicemia , muerte y metástasis

PIOMETRA

Complejo endometritis quística hiperplasia y piometra de la perra y de la gata. Estimulo estrogénico excesivo y prolongado, se presenta en perros hermafroditas con Tumores de células de sertoli Macro: hiperplasia pared uterina y glándulas endometriales quísticas y visibles a simple vista. Sale un exudado sucio, café y de mal olor por la vulva, Piometra, Mucometra e hidrometra. Staphilococcus spp. ,Streptococcus y Escherichia coli Tratamiento: Histerectomía. Signos: Fiebre, poliuria, polidipsia, anorexia, neutrofilia, distensión abdominal, vómitos, toxemia, bacteriemia y glomerulonefritis. Perras viejas, en la mayoría hay cuerpo lúteo persistente.

Salpingitis Vía ascendente del útero Infecciones vecinas peritoneales y hematógenas Streptococcus, Staphylococcus, E. Coli, Corynebacteium, Trichomonas, Brucella abortus, Tuberculosis. Bilaterales con descamación celular, linfocitos y células plasmáticas, proliferación de células del estroma.

IMPÈTIGO: infección superficial de la piel : NIÑOS

INFECCIONES EN LA EPIDERMIS IMPETIGO AMPOLLAR Agente Causal: Staphylococcus aureus Lesiones: Ampollas que se rompen dejando zona eritematosa que se cubre con costras finas

INFECCIONES EN LA EPIDERMIS FORUNCULOSIS Agente más frecuentemente encontrado: S. aureus lesión: afecta tejido subcutáneo y produce síntomas sistémicos

INFECCIONES EN LA DERMIS Celulitis Necrotizante Monomicrobiana Agentes Causales: S. aureus y S. pyogenes Lesión: Eritematosa, caliente, dolorosa y con bordes mal definidos

SINDROME DE LA PIEL ESCALDADA Agente Causal: Staphylococcus aureus – toxina exfoliatina Foco de Infección: Piel u otra localización Lesión: Enrojecimiento de la piel, dolor cutáneo que evoluciona en ampollas que se rompen y dejan la piel al descubierto

SINDROME DEL SHOCK TOXICO Estafilocóccico: Producción de SST-1 Cuadro Clínico: Fiebre > 38.9 ºC Eritrodermia difusa Hipotensión arterial Descamación de la piel Sistémica: SNC, hepático, hematológico, muscular o mucosas

infecciones Heridas quirúrgicas infectadas: foco para infecciones Sistèmicas bronconeumonía. adquirida en comunidad= neumonía viral Neumonía nosocomial Bacteriemia asociadas a enfermedades malignas. BACTEREMIA: Endocarditis, osteomielitis, pioartritis. Meningitis peritonitis

Clinical Manifestations of S Aureus

Clinical Manifestations of S Aureus

Intoxicaciones alimentarias Producción de exotoxinas

Enzimas Beta lactamasas: RESISTENCIA A LA PENICILINA Y AMPICILINA

ENZIMAS Alfa-toxinas: Acción Citolítica: Forma poros en las membranas Leucocitos PMN LISIS DE GLOBULOS ROJOS Toxinas para dañar membranas) Alfa-toxinas: Acción Citolítica: Forma poros en las membranas Acción Dermonecrótica en el conejo Letal en el ratón Es una neurotoxina Causante de los síntomas del Shock Tóxico Beta-toxina: (Doble halo de hemólisis en agar sangre) Esfingomielinasa. Sin actividad en células humanas Delta-toxina: Sin papel conocido Gamma-toxina: Actúa como surfactante y activa la adenilatociclasa lo que resulta en la producción de AMP C : diarrea Actúa como necrotizante de la piel HEMOLISINAS:

TOXINAS Leucocidina Exotoxina: MEMBRANA DE LEUCOCITOS PMN FORMA POROS: ALTERAN PERMEABILIDAD EXFOLIATINAS: epidermolìticas: formado por 2 proteínas: ET-A ET-B proteolítica, disuelve la epidermis síndrome de la piel escaldada

PIEL ESCALDADA FORMACION DE ESCARAS EN LA CAPA SUPERFICIAL DE LA PIEL. PIEL DESNUDA Y CARNE VIVA

Staphylococcus coagulasa negativos

Staphylococcus epidermidis 50- 80% de aislamientos son coagulasa negativos Endocarditis catéteres intravenosos Peritonitis Bacteremia Osteomielitis Inf. Heridas Infecciones de vías urinarias

Staphylococcus epidermidis adherencia Macromoléculas en la superficie celular y extracelular. Plásticos y elementos extraños. Adhesina del polisacárido capsular Interacción con componentes tisulares y sèricos

Interacción con proteínas del tejido conectivo y proteínas sericas. Pasos Iniciales De La Colonización Tisular Para Establecimiento De Infecciones De Heridas Quirúrgicas Interacción con proteínas del tejido conectivo y proteínas sericas.

COLONIZACION PRODUCCIÒN DE GLICOCALIZ: MATRIZ EXTRACELULAR MUCOSA. FORMACION DE BIOPELICULAS EN SUPERFICIES PLÀSTICAS LA MATRIZ AFECTA LA FAGOCITOSIS AL INHIBIR LA QUIMIOTAXIA DE PMN

Otros Staphylococcus Coagulasa Negativos Staphilococcus saprophyticus Staphilococcus mulans Staphilococcus lugdunensis

Staphylococcus saprophyticus Patògeno I. U en mujeres jóvenes 2 causa de cistitis Pielonefritis 41-86 %de pacientes. Uretritis en hombres y mujeres I. U por sondas Prostatitis en ancianos Suplementos de nutrición parenteral bacteremia y sepsis. Recto más frecuentemente colonizado.

TEST DE LA NOVOBIOCINA

Staphylococcus saprophyticus FACTORES DE VIRULENCIA Mayor Adherencia a células uroepiteliales, uretrales. Ureasa: invasión de tejido vesical Proteína fibrilar asociada a la superficie de la célula

Otros Staphylococcus coagulasa negativos – Staphilococcus haemolyticus – Staphilococcus hominis – Staphilococcussimulans – Staphilococcus lugdunensis – Staphilococcus scleiferi – Staphilococcus warneri - Staphilococcus saccharolyticus

MORFOLOGIA

DIFERENCIACION DE LOS MIEMBROS DE LA FAMILIA MICROCOCACEAE Frotis teñido con GRAM : Staphylococcus Cocos Gram positivos. 0.5um – a más de 1um de diámetro. Aislados, pares, cadenas cortas, en grupos tanto por dentro como por fuera de los leucocitos PMN. Difícil de identificarlos en frotis directos con los Streptococcus, Micrococcus, y Peptoestreptococcus.

MORFOLOGIA D ELAS COLONIAS Staphylococcus: desarrollo más rápido. 1-2 mm de diámetro después de 24 h. Lisas, mantecosas, ligeramente convexas Bordes enteros Pigmentos Muestran variedad en el tamaño dando un aspecto mixto. Micrococcus: Crecen lentamente 48h de incubación 1- 2 mm. de diámetro Mate, convexas regulares Pigmentos

Prueba de catalasa Catalasa positiva. Raras cepas de Staphylococcus catalasa negativa Enterococcus Pseudocatalasa. Staphilococcus. mucilaginosus : negativo o débil positivo

METODOS PARA DIFERENCIAR Staphylococcus Micrococcus fermentación de la glucosa OF + - producción de ácido a partir de el glicerol susceptibilidad a al furazolidina SUSCEPTIBLE RESISTENTE susceptibilidad A la bacitracina

Staphylococcus aureus Prueba de coagulasa en portaobjetos: COAGULASA UNIDA O FACTOR DE AGREGACIÒN. COAGULASA EN TUBO: EDTA Enzima extracelular - 4 h después de la incubación a 35 c deben mantenerse a temperatura ambiente y leídas a las 24- 48h producción de fibrolisinas AGLUTINACION CON LATEX: plasma determinación de proteína A

Staphylococcus aureus RARAS CEPAS Staphilococcus. aureus coagulasa negativa. COAGULASA POSITIVAS Staphilococcus. intermedius Staphilococcus hyicus Staphilococcus delphini Staphilococcus schleiferi

ESQUEMA DE IDENTIFICACION muestra clinica Abscesos, heridas,secreciones, otros Frotis directo coloreado con gram: cocos Gram (+) Agar sangre y caldo de enrriquecimiento significativo si se observa abundantes PMN Incubacion 36°C,37°C, 18-24 H Colonias aisladas observar hemolisis Prueba de catalasa (+) Prueba coagulasa Gram: cocos Gram (+) en Racimo positiva negativa Susceptibilidad a la novobiocina S aureus resistente sensible S saprophyticus S epidermidis

Staphilococcus aureus

PRUEBA DE DNA ASA PRUEBA DE DESOXIRRIBUNUCLEASA Staphilococcus aureus produce DNA asa que hidroliza el ADN.

Susceptibilidad a la Novobiocina

Staphilococcus aureus N: Staphilococcus epidermidis CATALASA: POSTIVA Staphylococcus spp COAGULASA P: Staphilococcus aureus N: Staphilococcus epidermidis Staphilococcus saprophyticus NOVOBIOCINA P: Staphilococcus epidermidis (>16) N: Staphilococcus saprophyticus (<16)

COLONIAS DE Staphylococcus aureus

GRAM DE Micrococcus spp

COLONIAS DE Micrococcus spp