BIOLOGÍA MOLECULAR Carolina Pérez Almendro Hospital U. Doce de Octubre

Enfermedades trombóticas, como la trombofília Cáncer de colon. La Biología Molecular es la ciencia que tiene como objetivo el estudio de los procesos que se desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista molecular. La biología molecular se encarga principalmente del entendimiento de las interacciones de los diferentes sistemas de la célula ,entre ellas las del DNA y el RNA, que son las que vamos a estudiar, ya que el Hospital Universitario Doce de Octubre, se encargan del estudio de diferentes mutaciones para el diagnostico de : -Leucemias Enfermedades trombóticas, como la trombofília Cáncer de colon. Por lo que podemos decir que la Biología Molecular de dicho hospital tiene su base en la hematología.

PREPARACIÓN DEL DNA Y RNA Para realizar estás técnicas en primer lugar tenemos que extraer el DNA o RNA, de las diferentes muestras, como pueden ser sangre periférica, Medula Ósea, o biopsias de colón. Dependiendo de la técnica que se necesite se va a usar DNA o RNA. -La extracción del DNA es bastante sencilla, ya que se basa en una máquina que con diferentes reactivos y tampones, los cuales están a diferente PH, van a extraer el DNA -La extracción del RNA es bastante compleja, ya que antes de su extracción hay que hacer un lavado y separar los leucocitos, a continuación se le van echando diferentes reactivos, centrifugando hasta su extracción.El RNA se deteriora en muy poco tiempo hay que hacer una retrotranscripcion y transformarlo en DNA, y posteriormente realizar una PCR, para ver de que calidad es el RNA extraído, ya que si es de mala calidad, se comunica.

SECUENCIACIÓN DEL DNA La secuenciación de ADN es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad es la determinación del orden de los nucleótidos (A, C, G y T) en un oligonucleótido de ADN.

Secuenciación por fluorescencia En el Doce de Octubre realizan una secuenciación por fluorescencia que consiste en lo siguiente en marcan cada uno de los cuatro didesoxinucleótidos que terminan la cadena con un colorante fluorescente diferente, con fluorescencias a diferentes longitudes de onda. Este método es atractivo por su gran capacidad y rapidez y actualmente es el método de referencia en la secuenciación automatizada con analizadores de secuencia controlados por computadora. Entre sus limitaciones potenciales están los efectos de los terminadores fluorescentes en el fragmento de ADN, que produce alturas y formas de picos desiguales en los registros de secuencia de ADN del cromatograma tras la electroforesis capilar. El método de secuenciado por terminador fluorescente junto con analizadores de secuencia de ADN de alto rendimiento se utiliza ahora para la inmensa mayoría de los proyectos de secuenciación, puesto que es más fácil de llevar a cabo y tiene un coste menor que los anteriores métodos de secuenciación, pero la mayor ventaja de este método es que la secuenciación se puede llevar a cabo en una sola reacción, en lugar de en cuatro reacciones como en el método del cebador marcado. En una secuenciación por terminador fluorescente se

A continuación, una vez obtenida la gráfica, se miraba donde había una mutación y comparando con unos patrones de mutaciones, se llegaba a saber cual era la mutación y cual era el problema que acarreaba.