Zeiss 21 Tutorial de Uso Básico Tutorial Zeiss 21

Zeiss 21 “Tutorial de Uso” Características Zeiss 21…………………....pag.3-4 Pasos iniciales Uso Zeiss 21……………….pag. 5 Luz Transmitida Trabajo con luz transmitida Campo Claro………………………………………….…pag. 6 Trabajo con luz transmitida Contraste de Fases……………………………………….…pag.7 Trabajo con luz transmitida Contraste Interdiferencial DIC……………….……….…pag.8-9 Fluorescencia Trabajo con luz reflejada (fluorescencia)………………………….…pag.10-11 Utilidades de interés…………………...….pag.12-13 Tutorial Zeiss 21

Microscopio de Fluorescencia Filtros : 1-DAPI/azul 9-Verde 15-Rojo Zeiss 21 APLICACIONES Microscopio de Fluorescencia Filtros : 1-DAPI/azul 9-Verde 15-Rojo Microscopio de Luz Transmitida -Contraste Interdiferencial (DIC) -Contraste de Fases (PH) -Campo Claro Localización : Microscopía Planta – 2 Tutorial Zeiss 21

Zeiss 21 CARACTERISTICAS . Objetivos : x 2,5 (Sin Fase ni DIC) x10 (Fase 1) x20 (Fase 2) (DIC 1) x40 (Fase 2) (DIC 3) DIC 1=DIC 0´3-0´4 DIC 3= DIC 5-14 Filtros Fluorescencia: 1-Azul/Dapi: BP 365 FT 395 LP397 9-Verde: (450-490) FT 510 BP525/50 15-Rojo: BP 546 FT 580 LP 590 Filtros/Anillos DIC -DIC I (0´3-0´4) -DIC II (5-14) Filtros/Anillos Fases -Ph1 -Ph 2 -Ph3 Condensador : 0,55 Equipo conectado : -Cámara Hamamatsu (c4742-95) -AttoArc HBO 100 W -Mac Power G4 Programa OPENLAB asociado Tutorial Zeiss 21

Pasos Iniciales Uso Zeiss 21 2-Encendemos el Ordenador asociado ( MAC) para acceder al programa de captura de imágenes “Openlab”. 3-Encendemos la cámara asociada al equipo para la captura de imágenes (cámara Hamamatsu). 1-Encendemos el microscopio Zeiss 21 (botón lateral derecho). Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Transmitida (Campo Claro)(BF) 1-Retiramos de la vía de la luz los 3 filtros: -obturador tansmitida. -filtro neutro. -polarizador DIC. 3-Colocamos la posición de transmitida en la rueda : Posición D/vacío. 3 1 2-Retiramos el Analizador DIC inferior (tirando de la barra hacia fuera) 4-Sacamos el cubo de filtros fluorescencia (se desplaza por un sistema de corredera) 4 2 Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph) 4-Observamos las características de Fases/Ph que posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan Fases/Ph) . Las características vienen marcadas en cada Objetivo ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web. 1-Retiramos de la vía de la luz los 3 filtros: -obturador tansmitida -filtro neutro -polarizador DIC 4 1 2-Retiramos el Analizador DIC inferior (tirando de la barra hacia fuera) 3- Retiramos la barra de filtros de fluorescencia 5-Colocamos la posición de la rueda en la Fase que marca el objetivo con el que estamos trabajando : Ph 1/ Ph 2 /Ph 3 2 5 3 Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC) 2 1 1-Observamos las características DIC que posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan DIC) . Las características de DIC del Objetivo vienen marcadas en la cuña asociada a cada Objetivo ,se puede retirar la cuña DIC con cuidado para verlo (I= DIC I; II=DIC II; III=DIC III) ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web. 2-Colocamos la rueda DIC/fases en la misma posición que la del objetivo que estamos usando para ver nuestra muestra. DIC 0´3-0´4 = DIC I DIC 5-14 = DIC II Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC) 3 4 3-Introducimos en la vía superior el polarizador DIC y retiramos los otros 2 filtros (obturador transmitida y filtro neutro) . 4-Aplicamos el analizador DIC insertándolo hacia dentro (este analizador se sitúa bajo el cubo de filtros de fluorescencia que se haya bajo el revolver de objetivos invertidos del Zeiss 21). Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia) NORMAS BÁSICAS Para evitar la pérdida/quemado de la fluorescencia de nuestra muestra cada vez que no estemos capturando la imagen es recomendable USAR la “barra/obturador de Fluorescencia”: La barra tiene 2 posiciones: 1-Obturador de Fluorescencia (tal y como se muestra en la foto) (hacia afuera). 2-Posición vacío para ver la fluorescencia (introducimos la barra hacia adentro). 1-Encender la lámpara de Fluorescencia . Antes de encender la lámpara de fluorescencia es necesario verificar en el Registro de Uso del equipo que han transcurrido un mínimo de 30 minutos desde la sesión previa ( recordar que existe riesgo de explosión de la lámpara de mercurio (vapores tóxicos) si se enciende en caliente). Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia) Uso de la Fluorescencia. Figura A 2-El sistema de filtros de fluorescencia del Zeiss 21 se basa en una “ barra-cubo corredera” colocada bajo el revolver de objetivos invertidos, este cubo de filtros se desplaza sobre un rail y se puede colocar en 3 posiciones : Rojo / Verde / Azul Para trabajar con luz transmitida (campo claro /DIC /Fases) es necesario retirar este cubo y para volver a colocarlo en su posición original se inserta (en la misma posición q la figura A , con las pegatinas de los filtros mirando hacia nosotros ). 1-Colocamos el Obturador de luz transmitida en la vía superior y retiramos los otros 2 filtros: -polarizador DIC y -filtro neutro. Tutorial Zeiss 21

UTILIDADES DE INTERES 1 2 1-La palanca actúa como un obturador de la imagen a los binoculares , presenta 2 posiciones: 1-hacia adentro corta la imagen, no se ve. 2-hacia afuera permite ver la muestra . 2-El botón regula la intensidad de luz q llega a los binoculares , presenta 2 posiciones con mayor y menor nivel de luz que podemos observar al ver nuestra preparación. Tutorial Zeiss 21

UTILIDADES DE INTERES La principal aplicación del Zeiss 21 es el uso para estudio de cultivos celulares por ello por defecto la platina carece de soporte para portaobjetos , esta se encuentra desmontada pero puede acoplarse si es necesaria. Tutorial Zeiss 21

Unidad de Microscopía Centro de Investigación del Cáncer Campus Miguel de Unamuno 37007 Salamanca (Spain). Tutorial Zeiss 21