RECUENTO DE BACTERIAS AEROBIAS VIABLES Trabajo práctico N° 7 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MAR DEL PLATA FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS MICROBIOLOGIA GENERAL 2012

INTRODUCCIÓN Tamaño de poblaciones bacterianas Alimentos Suelo Leche Agua Otros Suelo Inoculantes

TÉCNICAS FISICAS BIOLÓGICAS Cámara de recuento Contador Coulter Recuento directo en placa 1- Superficie 2- Placa vertida Recuento indirecto Estimación del número: Ej. Coliformes, bacterias fijadoras de nitrógeno, etc.

TECNICAS RECUENTO EN PLACA Variación de condiciones Determinación del número Unidades Formadoras de Colonias (UFC) que desarrollan en placas con medio de cultivo específico que han sido inoculadas con cantidades conocidas del material objeto de estudio e incubadas en condiciones ambientales predeterminadas. Variación de condiciones Composición del medio Gases de la atmósfera Tiempo y Temperatura de incubación

Leche Evaluación de la calidad sanitaria del producto Durabilidad del producto Límite establecido por el CAA: 500.000 UFC/mL

Leche Cuando la leche deja la ubre, comienza a contaminarse: bacterias del estiércol bacterias de la ubre o piel agua suelo forraje instalaciones Streptococcus Coliformes Termófilas Psicrófilas

Leche higiene del animal asepsia durante el ordeñe

Entonces…… Si el recuento de bacterias al ordeñe es alto, posiblemente se encuentren microorganismos psicrófilos y otros que resistan la pasteurización… La eliminación de esos microorganismos no asegura el mantenimiento de la calidad, ya que muchos pueden liberar enzimas que no son destruidas por el proceso.

Suelo Influencia de las raíces sobre las poblaciones microbianas Información sobre la actividad microbiológica de ese suelo 1- bacterias 2- hongos 3- actinomycetes Influencia de las raíces sobre las poblaciones microbianas

Otros productos Inoculantes comerciales Otros alimentos INDICADORES  Calidad comercial  Calidad higiénico-sanitaria

Recuento directo en placa Una célula o un grupo de células dará origen a una colonia luego de la siembra e incubación. Por lo general se evalúan muestras pequeñas y representativas, por lo que se pueden producir errores (necesidad de repeticiones) Presencia de viables no cultivables (pH, temperatura, tiempo, medio de cultivo)

Técnicas de recuento directo Siembra en superficie La muestra se inocula en la superficie de la placa de Petri que contiene el medio de cultivo adecuado. Microorganismos aerobios estrictos, facultativos Siembra en placa vertida La muestra se inocula en el fondo de la placa de Petri estéril y vacía y luego se vierte el medio de cultivo adecuado.  Microorganismos aerobios facultativos y anaerobios aerotolerantes

Técnica de diluciones seriadas Muestra líquida 9 ml sol fisiológica 10 -3 10 -4 10 -5 10 -6 1 ml muestra 99 ml solución fisiológica 1 ml 10 -2 PLACA VERTIDA

Recuento En el caso de leche y alimentos, las placas se incuban por un período de 24 a 48 h a 37°C Se cuentan las UFC en la placa en que se observen entre 30 y 300. El número de UFC se multiplica por la inversa de la dilución donde se realizó la lectura. Ej. 80 UFC x 104 ( de la dilución 10-4) El resultado se expresa en UFC / mLde muestra

Técnica de diluciones seriadas Muestra sólida 9 ml sol fisiológica 10 -2 10 -3 10 -4 10 -5 10 -7 10 g muestra 90 ml solución fisiológica 0,1 ml 10 -1 EN SUPERFICIE

Recuento En el caso de suelos y microorganismos relacionados a él, las placas se incuban por un período de 24h a 5-7 días, a 28°C Se cuentan las UFC en la placa en que se observen entre 30 y 300. El número se multiplica por la inversa de la dilución donde se realizó la lectura y se corrige por el factor de dilución (alícuota de siembra) Ej. 80 UFC x 104 (de la dilución 10-4) x 10 (volumen sembrado en placa 0,1 mL) El resultado se expresa en UFC / g de muestra