TÉCNICAS DE TINCIÓN Junio, 2018 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR CENTRO DE BIOLOGÍA

TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA PREPARACIÓN COLOREADA 1. Frotis o película (extensión) 2. La fijación 3. Coloración.

TIPOS DE TINCIONES

MORFOLOGÍA CELULAR

TINCIÓN DE CÉLULAS PARA OBSERVACIÓN

TINCION GRAM PARED CELULAR GRAM + Peptidoglicano hasta 90% de la pared celular PARED CELULAR GRAM -

PEPTIDOGLICANO  El peptidoglicano, es un polisacárido formado por dos derivados de azúcares —N-acetilglucosamina y ácido N-acetilmurámico— y un pequeño grupo de aminoácidos que incluye L- alanina, D-alanina, D-glutámico y lisina o en su lugar ácido diaminopimélico (DAP  Se conocen más de 100 tipos distintos de peptidoglicano.  En especies gramnegativas existen capas adicionales que se sitúan en el exterior de ésta.  Se presenta solamente en especies de Bacteria.

ESQUEMA ESTRUCTURA BACTERIANA

TINCIÓN GRAM

Cocos Gram + Bacilos Gram + L Tinción de Gram TINCIÓN DE GRAM COCOS GRAM + BACILOS GRAM +

Cocos Gram -Bacilos Gram - L Tinción de Gram TINCIÓN DE GRAM COCOS GRAM - BACILOS GRAM -

COLORACIÓN DE AZUL DE METILENO DE LOEFFLER ( TINCIÓN DE CORPÚSCULOS METACROMÁTICOS ) 2.- Cubrir la preparación con Azul de Metileno 5’ 3.- Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio 1.- Hacer un frotis con Yogurt/ desengrasar con metanol Corpúsculos metacromáticos

TINCIÓN NEGATIVA

Frotis y fijación 1.-Poner una gota de agua en un porta 2.- Tomar la muestra de un cultivo 3.-Extender sobre el agua y fijar a la llama del mechero 1.-Cubrir la preparación con Fuchina fenicada 2.-Calentar con un hisopo de algodón empapado en alcohol y prendido con la llama del mechero hasta la emisión de vapores. Mantener durante 5 minutos. 3.-Lavar con agua y decolorar con alcohol ácido 4.-Teñir con Azul de Metileno 1’ 5.-Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio Tinción Tinción de ácido-alcohol-resistente.

BACTERIAS ÁCIDO RESISTENTE Los microorganismos ácido - resistentes se caracterizan por tener una pared celular gruesa de cera (lipoidal) que contiene ácido micólico.

LA TINCIÓN DE FLAGELOS DE LEIFSON 1.Se fija químicamente la suspensión bacteriana, mediante formol, y se hace la extensión en un portaobjetos. 2.Se deja secar al aire, sin calentamiento alguno. 3.Se cubre la preparación con una mezcla de ácido tánico y el colorante rosanilina, de preparación extemporánea. El ácido tánico engruesa los flagelos y la rosanilina los tiñe. 4.Se retira el exceso de colorante con agua. 5. Por último, se deja secar al aire, antes de su observación al microscopio.