Injinerutza genetikoa
ADNaren manipulazioan oinarritutako teknika- multzoa. Adibide bat: Klonazioa Kopia berdin-berdinak lortzeko prozesua Oso eremu anitzetan aplikatu ADN zatiak, zelulak edo indibiduoak
Klonazio metodoaren faseak ADN-zatiak lortzea ADN bektore bati lotzea (plasmidoa), birkonbinazio bidez Zelula hartzailean sartu ADN klonatua identifikatu
1. ADN-zatiak lortzea Errestrikzio-endonukleasak erabiliz ADN-helize bikoitzetako fosfodiester loturak hautsi Errestrikzio-dianatik
Errestrikzio-dianak: Kate bakoitzean posizio desberdinean kokatutako ebaketa eragin. Eco RI entzima Bi kateen puntu berean ebaki. Hae III errestrikzio-entzima
2. Lortutako zatiak plasmido bati lotzea Plasmidoa aurrez aldetik hautatu Ezaugarriak: Errestrikzio-diana bakarra izatea Ez zelularen gainean eragin birulentorik sortaraz dezakeen generik Bi gene: bi antibiotiko desberdinekiko erresistentzia eman
Errestrikzio-entzima berak ebakitakoak izatea komeni ADN-zatiaren + plasmidoaren arteko batura errazteko EcoRI: muturrak kohesiboak dira Hae III: kate sinple bat lotu, transferasa terminalaren bidez. Beste ADNan aurrekoaren kate osagarria sortu, ADN ligasak lotu
EcoRI http://highered.mheducation.com/olc/dl/120078/bio37.swf
3. ADN brikonbinatzailea zelula hartzailean sartzea 3.1. Lortutako plasmidoa inkubatu Espezifikoki hautatutako bakterioekin 3.2. Plasmidoa bakterio-zelulei erantsi Baldintza egokietan
4. ADN klonatua identifikatzea Baldintza egokietan egin arren, akatsak agertu daitezke: Plasmidoaren + klonatu beharreko ADNaren arteko loturan Plasmidoa bakterio-zeluletan egindako inkorporazioan
Kultiboan: Plasmidora inkorporatu diren zelulak ADN-zatia ez duen plasmidoa inkorporatu duten zelulak Plasmidoa inkorporatu ez duten zelulak Bakterio-koloniak bereizi + hautatzeko: antibiotikoetan oinarritutako tratamentuak aplikatu Plasmidoak erresistentzia ageri horiekiko