Expresión de genes angiogénicos en Cáncer no microcítico de pulmón (CNMP) resecable A. Cabrera1,3, E. Jantus Lewintre1,3, R. Sirera1,3, A. Honguero2, M. Gil3, A. Blasco3, E.Sanmartin1,3, N. Del Pozo3, R. Guijarro4, C. Camps1,3 1 Laboratorio de Oncología Molecular, Fundació d’Investigació Hospital General Universitari de València 2 Hospital General de Albacete 3 Servicio de Oncología, Hospital General Universitario de Valencia 4 Servicio Cirugía Torácica, Hospital General Universitario de Valencia

Introducción y justificación La justificación para realizar este trabajo surge del hecho, que aunque los estadios precoces sean resecables, su rango de supervivencia es amplio. Sabiendo que la angiogénesis es el paso esencial para el crecimiento tumoral, conocer la expresión de genes proangiogénicos en esto estadios precoces podría identificar a los grupos de riesgo de recurrencia tras la resección. La familia de ligando y receptores del factor de crecimiento vascular endotelial se ha descrito como potentes factores angiogénicos implicados en el crecimiento tumoral. En esta diapositiva se sintetiza la diversa familia de factores de crecimiento y receptores del vascular con sus interrelaciones. En nuestro trabajo, estudiaremos la expresión de Vascular A, PIGF y receptores 1 y 2 del vascular. CNMP principal causa muerte por cáncer Estadios precoces, aunque resecables, presentan amplio rango de supervivencia Angiogénesisesencial para crecimiento tumoral Dentro de cada estadio, la expresión genes proangiogénicos podría identificar grupos de riesgo de recurrencia. Hicklin, D. J. et al. J Clin Oncol; 23:1011-1027 2005

Objetivo Analizar los niveles de expresión de los genes angiogénicos (VEGFA, PlGF, VEGFR1, VEGFR2) en pacientes con cáncer no microcítico de pulmón (CNMP) en estadíos resecables y correlacionar su expresión con características clinicopatológicas.

Tiempo de seguimiento: Material y métodos Cohorte (N=135): Pacientes con CNMP resecado Estadio clínico (TNM 6ª edición AJCC del 2002 ) No. de pacientes % I 72 54.1 II 26 19.5 III 35 26.3 Subtipo histopatológico Carcinoma epidermoide 63 46.7 Adenocarcinoma 49 36.3 Otros 23 16.9 Edad Mediana y rango 64 (37-85) Sexo No de pacientes % Femenino 13 9.6 Masculino 122 90.4 Se recogieron 135 pacientes con CNMP estadios precoces resecables, sin tratamiento quimioterápico previo. El tiempo de seguimiento fue calculado desde la intervención hasta el exitus o última evolución, con una media de 15.8meses Tiempo de seguimiento: 15.8 meses (rango 1.26- 50.9 meses) **Muestra de tejido obtenida antes de quimioterapia o radioterapia

Material y métodos Tejido tumoral y sano Análisis estadístico: Software SPSS 13.0 Extracción RNA Fórmula de Pfaffl F El procedimiento de recogida, amplificación y análisis fue el siguiente. Se tomó muestra tumoral y de tejido sano del mismo paciente en el acto quirúrgico, siempre en pacientes con CNMP enfermedad resecable sin QT previa, . Se realizó extracción de mRNA y síntesis de copia de DNA, amplificándola mediante PCR a tiempo real. La cuantificación de los genes problema se expresó de forma relativa y se normalizó usando la fórmula Pfaffl. El análisis estadístico se realizó con al programa SPSS v 13.0 Ct Ciclo Síntesis cDNA RT-qPCR

Expresión relativa de genes Subtipo histopatológico Resultados Expresión relativa de genes (fórmula de Pfaffl) Expresión de genes angiogénicos en función de: N Mediana [min-max] PlGF 119 3.07 [0.08-49.16] VEGFA 122 0.93 [0.09-5.1] VEGFR1 120 0.7 [0.09-10.9] VEGFR2 117 0.43 [0.07-3.03] Subtipo histopatológico p= 0.005 Adenocarc. C. epiderm. Mediana 2.19 4.74 N 42 57 Sobre expresión de factores proangiogénicos como receptores de los mismos, siendo el que más se sobre expresó el PIGf. En el estudio por subgrupos histológicos, PIGf se sobre expresa más en el subgrupo Tumores escamosos, como se ha visto también en otros trabajos. En resto de genes estudiados no se ha encontrado en nuestro trabajo relación con los subgrupos histológicos.

Resultados Correlación positiva con: Coeficiente de Spearman p PlGF and VEGFA 0.014 VEGFA and VEGFR1 <0.0001 VEGFA and VEGFR2 0.001 VEGFR1 and VEGFR2 Expresión relativa de genes en función del tamaño del tumor. Tamaño tumoral <3.5cm >3.5cm p *PlGF 1.07 0.57 0.002 *VEGFR1 0.29 0.12 <0.0001 *VEGFR2 0.16 0.09 *VEGFA 0.39 Al agrupar los pacientes en función de tamaño tumoral, los tumores de menor tamaño expresaban una concentración relativa mayor que en los tumores de mayor tamaño; lo que muestra la importancia de la angiogénesis en los estadíos mas precoces, cuando el tumor primario está en proceso de crecimiento. * Expresión relativa de genes (expresión relativa de genes /tamaño tumoral)

Supervivencia Libre de Progresión Resultados Expresión VEGFA-VEGFR1 y SLP Expresión VEGFA-VEGFR1 y SG Supervivencia Libre de Progresión 26.63 meses PFS 18.4 meses 38.03 meses 27.1 meses Clasificando los pacientes en función si co expresan de niveles elevados de VEGFA y VEGFR1 (HH) o co expresan niveles bajos de ambos o de uno ellos. Los pacientes con una coexpresión elevada de ambos ( linea azul), tienes peor pronostico con peor spv global y pero SLP (OS: p=0.066, PFS: p=0.058, log-rank test) que los otro grupos. Aunque estos resultados no son estadisticamente significtivos en el global de pacients si se ve una clara tendencia a la separación de las curvas. VEGFA_VEGFR1 (expresión relativa) N Mediana (meses) IC(95%) p Alta/Alta 40 18.4 9.46-27.34 0.058 Baja/Baja-Baja/Alta 77 26.63 17.87-35.39 VEGFA_VEGFR1 (expresión relativa) N Mediana (meses) IC (95%) p Alta/Alta 40 27.1 16.9 - 37.26 0.063 Baja/Baja-Baja/Alta 77 38.03 No alcanzado

Resultados Grupo de “Sólo Cirugía”  Expresión de VEGFA-VEGFR1 y TTP Grupo de “Sólo Cirugía”  Expresión de VEGFA-VEGFR1 y SG Grupo de “Sólo Cirugía”  Expresión de VEGFA-VEGFR1 y TTP Cuando estudiamos la SG y SLP en función de la coexpresión elevada o no de VGFA y VGFR1, el grupo de pacientes que sólo se realizó cirugía, es decir , aquellos en los que se presupone tamaño más pequeño de tumor y sin riesgo de recaída por ausencia de infiltración vascular o linfática local, si se encuentran estas diferencias estadísticas VEGFA_VEGFR1 (expresión relativa) N Mediana (meses) IC (95%) p Alta/Alta 19 18.4 8.04-28.75 0.005 Baja/Baja-Baja/Alta 50 No alcanzado VEGFA_VEGFR1 (expresión relativa) N Mediana (meses) IC (95%) p Alta/Alta 18 28.3 17.98-38.6 0.0033 Baja/Baja-Baja/Alta 50 No alcanzado

Resultados Grupo Tratamiento Adyuvante: Expresión de VEGFA_VEGFR1 y TTP Grupo Tratamiento Adyuvante: Expresión de VEGFA_VEGFR1 y SG VEGFA_VEGFR1 (expresión relativa) VEGFA_VEGFR1 (expresión relativa) N Mediana (meses) IC (95%) p Alta/Alta 24 27.1 12.49-41.70 0.930 Baja/Baja-Baja/Alta 35 30.1 12.98-47.27 N Mediana (meses) IC (95%) p Alta/Alta 24 20.03 2.17-37.9 0.894 Baja/Baja-Baja/Alta 35 17.2 8.47-25.98

Conclusiones En muestras de CNMP estadíos precoces resecables: Los niveles de sobreexpresión de PlGF parecen estar relacionados con la histología y el tamaño tumoral. La expresión de genes proangiogénicos tienen valor pronóstico en estadíos precoces.