Que seraaaa??? Polimorfismo Afecta: Se define como la existencia simultanea en una población de genomas con distinto alelos para un locus determinado, sea este génico o no. Afecta: regiones codificantes (polimorfismo génico) regiones no codificante

Polimorfismo en regiones codificantes Una variación en los genes polimorfos ( alrededor de 25.000) una cuarta parte, determina el polimorfismo génico. Se pueden distinguir dos situaciones : Sin efecto fenotípico Con alteración del fenotipo

Galactosemia La causa mas frecuente son mutaciones en el gen que codifica la enzima galactosa1-fosfato uridiltrasferasa (GALT). Los niños afectados son homocigotos en el locus GALT para un alelo mutante. La frecuencia de estos alelos varían mucho dependiendo de la población considerada. http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Autorecessive-es.svg

Imagen: biología molecular de José Luque http://www.memechef.com/memes/view/771/meme-fraid

Polimorfismo en regiones génicas no codificantes Existen regiones del ADN que forman parte del gen pero no codifican su producto génico. Promotores Intrones Regiones 5’ 3 ’

Polimorfismo en regiones no génicas La mayor parte de las mutaciones del genoma ocurren en regiones del ADN que no codifican ningún producto. Los cambios de base s en este ADN no tienen efecto fenotípico: es decir no se altera la secuencia, la estructura o la función proteica, por lo que no tiene ningún interés patológico directo.

hemos determinado que el arma homicida fue un cuchillo de sushi.. ¿Tendría hambre el culpable? ¿Quizás no consiguió salmón en su supermercado y regreso enfadado a casa? Dejemos las especulaciones para los escritores de telenovelas mexicanas… Ahora que tenemos las Evidencias.. Analicémoslas y Acabemos con este caso.. Me dio hambre tanta especulación…

Análisis de las Evidencias Criminalística de Laboratorio

Detección del polimorfismo de secuencia de adn Se utilizan distintas estrategias La forma mas directa es la secuencia de ADN Se suele acudir a otras técnicas (ej. RFLP) ¿QUE ES UN RFLP? Se basa en la detección de las variaciones de la secuencia del ADN que tienen como consecuencia un cambio en una diana de restricción Restriction Fragment Length Polymorphism o Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción

CHAVEZ SOLO EL SHOW QUE NO HAY TARIMA… SOLO DEL LUQUE Realicemos un RFLP Me da flojera muchachos… Estúdiense en capitulo 27 del Luque… y dejémoslo así Bueno.. Ya nos metimos con Chávez… Sigamos investigando a nuestros sospechosos… CHAVEZ SOLO EL SHOW QUE NO HAY TARIMA… SOLO DEL LUQUE Imagen: bioquímica con aplicación técnica Thomas Devlin

Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción Producción de una sonda reactiva Primero tengamos en cuenta algunas cosas… Solo se puede aplicar en muestras que estén nucleadas Se utilizan marcadores (sondas) Este estudio se basa en la hibridación Los fragmentos se analizan por el método de SOUTHERM Se realiza mediante una electroforesis Imagen: biología celular y genetica de Mosby

Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción B C ADN 1.- Extraemos la muestra de ADN Endonucleasas de restricción 2.- Insertamos endonucleasas de restricción Por cierto.. Ellas que hacen!? Método de Southern 3.- Realizamos una electroforesis en gel de agarosa Electroforesis Papel Absorbente Filtro de Nitrocelulosa 4.- Se coloca el gel sobre papel absorbente húmedo con disolución salina, y sobre el gel un filtro de nitrocelulosa y luego otra capa de papel absorbente. Una vez adherido se hibrida con ADN marcado La solución salina por capilaridad fluye hacia arriba a través de todas las capas superiores. Gel Agarosa Papel Absorbente A B C

Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción Método de Southern Día Paso Descripción 1 Se prepara la digestión y se incuba durante unas 2 horas 2 Los productos de digestión se colocan en el gel de agarosa y se someten a electroforesis durante unas 2 horas 3 Se tiñe el gel, se visualiza con luz ultravioleta u se fotografía 4 Se lava el gel en hidróxido sódico, se prepara la transferencia de Southern y se deja transfiriendo toda la noche 5 Se desmonta la transferencia y se fija el ADN a la membrana 6 Se marca radiactivamente la sonda 7 La sonda y la membrana se hibridan durante toda la noche 8 Se lava la membrana para eliminar la sonda no hibridada 9 Se expone la membrana con una película radiográfica 4 o 5 10 Se revela la película

Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción Imagen: biología molecular de José Luque

RFLP Como diagnostico de polimorfismo en la b-globina Imagen: biología molecular de José Luque Imagen: biología celular y genetica de Mosby

imagen: http://faculty.ksu.edu.sa/haseeb/Pages/AnimationRFLP.aspx

Acerca de la técnica de southern Consideraciones Técnica de Southern Cantidad de ADN necesario Aprox. 5 microg Tiempo medio 4 – 5 días Adecuación a la automatización No Resultados erróneos Infrecuente Problemas de contaminación Raro

Aplicaciones del RFLP Diagnostico de la paternidad biológica y seguimiento de arboles genealógicos Identificación de sospechosos en procedimientos penales, por comparación con el ADN procedente de diversos restos biológicos (sangre, semen, saliva, raíces de cabello, tejidos corporales diversos, piezas dentales, etc.) Identificación post-mortem de individuos, en casos judiciales o catástrofes Otras aplicaciones de interés diverso. Por ejemplo, es posible aplicar esta metodología a muestras clínicas con el fin de comprobar identidad de las biopsias, posibilidades de trasplante, inestabilidad genética característica de ciertos tumores, etc. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/kidneytransplantation.html http://www.enciclopediasalud.com/categorias/terapias/articulos/biopsia/

biochips, genochips o genosensores SABIAS QUE… Los son fruto de la biología molecular y la informática, están destinados al diagnostico molecular del futuro discriminando de una manera mas sencilla, rápida y automatizada la presencia de la enfermedad biochips, genochips o genosensores En el futuro se podrá disponer de marcadores tan fiables y sofisticados que pudiese diagnosticarse precozmente la alteración molecular!??? Se trata de placas de silicio, vidrio u otro material, a cuya superficie se han adherido de manera ordenada y conocida, diversas moléculas de ADNc especificas para un determinado gen y así detectar en que posiciones se encuentra el marcaje y diagnosticar la enfermedad Imagen: biología molecular de José Luque

BIEN, YA ANALIZAMOS LA EVIDENCIA CERREMOS ESTE CASO

ACERTARON.. EL SOSPECHOSO 1 y EL CULPABLE ES…….. ACERTARON.. EL SOSPECHOSO 1 Imagen: bioquímica Lehninger

BIBLIOGRAFIA Biología Celular y Genética.- Mosby Bioquímica. Lehninger Bioquímica con aplicaciones clínicas. Thomas Devlin Biología Molecular José Luis Luque

GRACIAS!!! ESPERAMOS NO SE hayan Convertido EN PARTE DE ESTE CASO…