ESCENA DEL CRIMEN.

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1 ESCENA DEL CRIMEN

2 Tecnología del ADN Recombinante
REPÚBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA UNIVERSIDAD DE CARABOBO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE MEDICINA “DR. WITREMUNDO TORREALBA” DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y FISIOLOGÍA SEDE ARAGUA Tecnología del ADN Recombinante INVESTIGADORES Br. Cillo, MARIA Br. Díaz Carlos br. García, gustavo Br. García, anndreina Jefa de Investigaciones: Prof. Lic. MARTHA PERNALETE NOVIEMBRE, 2012

3 Explicar en forma general como se obtiene un ADN recombinante.
Principales enzimas utilizadas en la obtención del ADN recombinante: El sistema de restricción/ modificación. Las ligasas. Otras enzimas. Proceso general para el clonamiento de genes. Explicar el fundamento de los métodos siguientes: Determinación del polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP). Métodos fundamentales que tienen aplicación en la resolución de casos de interés clínico: El polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP). EL CULPABLE

4 El culpable se ha dado a la fuga.. O tal vez no?
LA ESCENA DEL CRIMEN Ha ocurrido un Homicidio.. intriga , sangre y adn rodea este escalofriante hecho.. El culpable se ha dado a la fuga.. O tal vez no? Pues hay que averiguarlo.. Presten atención.. Y comencemos a investigar ..

5 Por lo tanto, la tecnología de ADN recombinante
¿Qué es? Es una molécula que proviene de la unión artificial de dos fragmentos de ADN Es el conjunto de técnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulación e inserción en otro diferente. imagen:

6 La Observación del lugar de los hechos
Ya sabemos que ocurrió.. Sabemos que hay una victima.. Pero.. Debemos precisar como sucedieron los hechos.. Inspeccionemos El lugar de los hechos y sus alrededores.. Y Veamos que encontramos

7 ENZIMAS DE RESTRICCIÓN DEL ADN RECOMBINANTE
Son enzimas con capacidad de escindir los enlaces fosfodiester de la cadena polinucleotidica de los ácidos nucleicos; son, por tanto, fosfodiesterasas. Nucleasas Su especificidad puede analizarse con respecto a tres criterios: Reconocimiento de nucleótidos, bien por la pentosa o bien por la base nitrogenada (solo en algunas nucleasas) Escisión en posiciones internas o terminales en la estructura primaria. Actuación sobre uno de los dos tipos de enlace fosfodiester

8 NUCLEASAS -Las exonucleasas - Las endonucleasas
1) Escisión en posiciones internas o terminales en la estructura primaria : -Las exonucleasas - Las endonucleasas Imagen: biología molecular de José Luque

9 2)Actuación sobre uno de los dos tipos de enlace fosfodiester
NUCLEASAS 2)Actuación sobre uno de los dos tipos de enlace fosfodiester Algunas nucleasas ( tipo a) actúan específicamente hidrolizando los enlaces fosfato formados con el OH 3´, mientras que otras (tipo b) hidrolizan los formados con OH 5´. Imagen: biología molecular de José Luque

10 NUCLEASAS 3) Reconocimiento de nucleótidos, bien por la pentosa o bien por la base nitrogenada Desoxirribonucleasas o DNasas, que actúan solo sobre DNA; ribonucleasas o RNasas, que hidrolizan RNA Imagen: biología molecular de José Luque

11 ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Características La importancia de las enzimas de restricción radica en su gran especificidad de reconocimiento de una secuencia de corta de DNA Se nombran con tres letras tomadas del genero y especie de la bacteria de la que se aislaron originalmente, que identifica el serotipo. Luego se identifica con un numero romano en el caso de que en una misma variante se hayan encontrado varias enzimas con distinta especificidad. Imagen: biología molecular de José Luque

12 ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Las enzimas de restricción se agrupan en tres familias, de acuerdo a sus propiedades: Imagen: biología molecular de José Luque

13 SISTEMA DE RESTRICCIÓN-MODIFICACIÓN
Imagen: biología molecular de José Luque

14 ENZIMAS DE RESTRICCIÓN DE TIPO II
Acción de las enzimas de restricción de tipo II Imagen: biología molecular de José Luque

15 ENZIMAS DE RESTRICCIÓN DE TIPO II
Extremos resultantes de la acción de las enzimas de restricción Imagen: biología molecular de José Luque

16 ADN- LIGASA Empalman la molécula DNA con el vector de clonación o con otro ADN. Utilizan ATP. Encargadas de cerrar las mellas que quedan entre segmentos reasociados ADN

17 Otras enzimas utilizadas en la obtención del ADN recombinante
Polinucleótido quinasa. Añade un grupo fosfato al grupo OH del extremo 5´ de un polinucleótido para marcarlo o permitirle la ligación. Fosfatasa alcalina. Elimina fosfatos terminales del extremo 3´ ó 5´ o de ambos. Terminal Transferasa. Añade colas homopoliméricas, genera extremos cohesivos en un fragmento de DNA.(Cebador 3’ OH libre) Taq ADN polimerasa Se une a una región de la doble hélice de ADN y posibilita la síntesis de una nueva cadena de ADN a partir de otra existente.

18 Muy bien, Sabemos que fue en una habitación
Muy bien, Sabemos que fue en una habitación.. Que hubo forcejeo, mucha ira, sangre y Comida sin terminar..

19 Indicios , interrogacion e investigaciones
Al parecer hubo algunos posibles testigos… Prosigamos la investigación y veamos que mas encontramos

20 CLONACION DE MOLECULAS DE ADN
Y EL ADN RECOMBINATE? ¿QUE ES LA CLONACION? Es la producción de un gran número de copias de una región de ADN o de ADNc. Se basa esta clonación en la realización de múltiples rondas de replicación, pero en este caso catalizada por la ADN polimerasa propia de la célula en la que se va a llevar a cabo el proceso, célula anfitriona.

21 Para su estudio Propiedades, función e aplicación comercial Ingeniería de proteínas Para la alteración de sus propiedades

22 2 de preparación de muestras.
ESQUEMA GENERAL DEL PROCEDIMIENTO DE CLONACIÓN Se inocula el fragmento de ADN que se va a clonar Son 7 etapas: 2 de preparación de muestras. 4 sucesivas de clonación propiamente dicha. 1 de expresión. Multiplicación bacteriana De manera que al dividirse la bacteria el vector se replica Cultivo en placas de agar Aplican antibióticos para eliminar bacterias que no hayan adquirido el gen de resistencia Medio de cultivo líquido VIDEO! Imagen: biología molecular de José Luque

23 Se parte de células nucleadas, normalmente sanguíneas.
ETAPAS DE LA CLONACION PRIMERA ETAPA Se parte de células nucleadas, normalmente sanguíneas. El fragmento a clonar se aisla del resto,mediante técnicas: Electroforesis en gel de agarosa. Imagen: biología molecular de José Luque

24 ¿Qué es un Vector? SEGUNDA ETAPA
ETAPAS DE LA CLONACION ¿Qué es un Vector? SEGUNDA ETAPA Molécula de ADN pequeño, fácil de aislar, con secuencia y mapa de restricción, de fácil inducción a la célula anfitriona y con capacidad de replicación autónoma. Imagen: biología molecular de José Luque

25 TERCERA ETAPA Imagen: biología molecular de José Luque
ETAPAS DE LA CLONACION TERCERA ETAPA Imagen: biología molecular de José Luque

26 Tipos de células anfitrionas:
ETAPAS DE LA CLONACION CUARTA ETAPA Métodos de introducción del ADN recombinante Tipos de células anfitrionas: Procariotas. Eucariotas. Imagen: biología molecular de José Luque

27 QUINTA ETAPA Imagen: biología molecular de José Luque
ETAPAS DE LA CLONACION QUINTA ETAPA Imagen: biología molecular de José Luque

28 ¿CUAL ES LA IMPORTANCIA DE ESTA CLONACION?
ETAPAS DE LA CLONACION SEXTA ETAPA SÉPTIMA ETAPA (OPCIONAL) 4ta etapa 5ta etapa 6ta etapa ¿CUAL ES LA IMPORTANCIA DE ESTA CLONACION? Imagen: biología molecular de José Luque

29 BIEN, Hemos concluido la fase de interrogaciones…
Gracias a Nuestra investigación hemos determinado que hay 2 posibles culpables Los llamaremos sospecho 1 y Sospechoso 2

30 Recolección de Evidencias
Estamos de nuevo en el lugar de los hechos.. Veamos que mas podemos encontrar para incriminar a uno de nuestros sospechosos.. Y por supuesto.. Descubrir el arma homicida.…