Inducción de proteína recombinante b-Lactamasa
Tecnología de DNA recombinante: Herramientas 1 Aislamiento del gen 2. Clonación y expresión Producción de la proteína Transcriptasa reversa Enzimas de restricción Célula huésped DNA polimerasa Ligasa Clones Sonda de DNA Véctor Medio de cultivo
Clonación del DNA DNA foráneo (secuencia que se desea clonar) Vector de clonación (vehículo) Organismo huésped (E. coli) Selección de vectores Vector híbrido o recombinante
Vector de clonación pET-24a(+)
Vector de recombinación pET- TEM-1 7200 bp
Un gene siempre tiene que ir flanqueado por una zona promotora y otra terminadora de la transcripción
trangene Secuencia de unión de la proteína represora Secuencia que codifica para la proteína represora
Además el vector PET tiene la secuencia del promotor T7 y de LacO cerca de la secuencia del transgene
El inductor del operón lac que utilizaremos será el isopropiltiogalactósido (IPTG).
COMPOSICIÓN. a) Genes estructurales (en tándem). gen lac z codifica para la β-galactosidasa el gen lac y que codifica para la permeasa de galactosido. el gen lac a, codifica para la acetiltransferasa de tiogalactósido.
b)Promotor Sitio donde la polimerasa de RNA se une al DNA antes del inicio de la transcripción. C) Operador Se localiza en traslape con el promotor , sirve como el sitio de unión para una proteína, que se conoce como represor.
d) Gen Regulador. El gen regulador puede estar cerca o lejos de los genes que están siendo regulados. El gen regulador codifica para una proteína específica, un producto denominado REPRESOR.