OPERON LAC.

Presentación del tema: "OPERON LAC."— Transcripción de la presentación:

1 OPERON LAC

2 OPERON LAC “Operón”: Es una unidad de transcripción: genes estructurales regulados por un promotor y un operador . Ejemplo: Los genes involucrados en el uso de la Lactosa como fuente de carbono, se encuentran agrupados y codifican para enzimas que participan en la misma vía metabólica. (También los genes involucrados en síntesis o degradación de amino ácidos)

3 OPERON LAC

4 COMPOSICIÓN. a) Genes estructurales (en tándem).
gen lac Z : β-galactosidasa el gen lac Y : permeasa del galactósido. el gen lac A : acetiltransferasa de tiogalactósido. Se transcriben desde un promotor común en un mRNA policistrónico, al traducirse da lugar a las tres enzimas.

5 COMPOSICIÓN b) Promotor Sitio donde la RNA polimerasa se une al DNA antes del inicio de la transcripción.

6 COMPOSICIÓN. c) Operador
Adyacente o traslapado con el promotor, sitio de unión de la proteína conocida como REPRESOR. d) Gen Regulador La expresión de los genes estructurales es controlada por un gen regulador específico, que puede estar cerca o lejos de los genes bajo regulación. El gen regulador codifica para una proteína, el REPRESOR.

7 El REPRESOR

8

9 En este tipo de operador inducible, el REPRESOR sólo puede unirse al DNA en ausencia de lactosa, la que funciona como un INDUCTOR.

10

11 CONTROL POSITIVO POR cAMP.
La presencia del complejo cAMP-CAP es necesaria para la transcripción del Operón, aun cuando la lactosa esta presente y el represor esté inactivo.

12

13

14

15 E. coli en medio mínimo Medio mínimo A Glu 2% B Lac 2 % C Glu + Lac 2 % D Glu 2 % E Glu + Lac 2 % 15 min ½ tiempo + Lac 2 % 7.5 min

16 Procedimiento 2.- Re suspender bacterias en 250 µL de amortiguador Z
1.- Centrifugar a 10,000 rpm, decantar sobrenadante 2.- Re suspender bacterias en 250 µL de amortiguador Z 3.- Añadir 25 µL de CHCl µL SDS 0.1 % 4.- Añadir 50 µL de ONPG, Incubar 2 min. TA 5.- Añadir 125 µL Na2CO3 1 M 6.- Observar color