EL ESTUDIO DE LAS CÉLULAS Microscopía

El Estudio de las Células Microscopía Óptica M. O. Técnica Histológica Microscopía Electrónica M.E.T. M.E.B.

MICROSCOPIA: Generalidades Resolución: capacidad de un microscopio para distinguir objetos separados por pequeñas distancias. Limite de resolución: mínima distancia entre dos puntos para que se vean separados. Los microscopios difieren en sus limites de resolución. -Limite de Resolución del M.O.= 0.25 mm -Limite de Resolución del M.E.= 0.20 nm (óptimo) y 1 a 2 nm (en la práctica) -Ojo Humano = 100 mm = 0,1 mm 1 mm = 0.001mm = 1 x 10-6 m 1 nm = 1 x 10-9 m

MICROSCOPIO ÓPTICO Microscopio óptico clásico

Observación al M.O. Microorganismos presentes en una gota de agua de charco. El M.O. permite observarlos vivos.

Técnica Histológica Obtención de la muestra Fijación con formol La observación al M.O. requiere del empleo de una técnica específica, la técnica histológica, que consta de los siguientes pasos: Obtención de la muestra Fijación con formol Deshidratación con alcoholes Aclaración con solventes no acuosos Inclusión en parafina Corte con micrótomo Rehidratación Coloración Montaje: colocación del corte en un portaobjetos

Observación de Preparado acino (cavidad glandular) núcleo de célula epitelial glandular Biopsia de glándula salival humana 40X Los núcleos se observan en color azulado y los citoplasmas en pardo.

Tipos de Microscopios Ópticos Se utilizan distintos tipos de microscopios para el estudio de diferentes aspectos de la estructura celular. Los mas comunes son: TIPO DE MICROSCOPIO CARACTERISTICA Campo luminoso Iluminación del objeto a observar. Contraste de fase Observación de células vivas, permite apreciar espesores. Interferencia-contraste diferencial Observación de movimientos de organelas (acoplado a video). Fluorescencia Distribución intracelular de moléculas con tinción fluorescente. Focal Imágenes tridimensionales. Excitación por Dos Fotones Microscopia tridimensional aplicable a células vivas. Campo Oscuro Partículas y pequeñas células vivas.

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISION (MET) DE BARRIDO (MEB) Imágenes planas de estructuras celulares Permite observar hasta macromoleculas Imágenes tridimensionales Células completas únicamente (limite de resolución 10 nm)

MICROSCOPIOS M.O. M.E. MECANISMO Dispersión luz Dispersión de e- UTILIZA Lentes Bobinas electromagnéticas AUMENTOS Hasta 1000 veces Un millón de veces COLORACIÓN Sí No FIJACIÓN Formol Glutaraldehído INCLUSIÓN Parafina Resinas CORTE Micrótomo Ultramicrótomo COLORANTES Diversos Contrastantes MONTAJE Porta y cubre de vidrio Grillas de metal o plástico

Escherichia coli al microscopio óptico E. coli Células de Escherichia coli, bacteria habitante del tracto intestinal.

Escherichia coli al microscopio electrónico de transmisión

Escherichia coli al microscopio electrónico de barrido (scanner)