XVII Congreso Nacional de Biología Del 29 de Marzo al 03 de Abril Tacna 2009

Universidad Nacional Mayor de San Marcos Facultad de Ciencias Biológicas Departamento de Microbiología y Parasitología Laboratorio de Control Biológico OPTIMIZACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO PARA LA PRODUCCIÓN MASIVA DE ESPORAS DE Beuveria sp COMO CONTROLADOR BIOLÓGICO

Pedro Castellanos, Norberta Martínez, Janet Laura, Yesenia Mallqui, Lizeth Rivas, Eddy Ortega, Janet Rodríguez. Email: pcastellanoss@unmsm.edu.pe

Introducción Los hongos entomopatógenos han jugado un papel importante en la historia del control microbiológico, los géneros de estos hongos más encontrados en la naturaleza son: Beauveria, Metharrizium, Entomophthora,Paecilomyces y Verticillium.

Introducción Las micosis son más comunes con ciertos grupos taxonómicos: Orden homóptera (áfidos y cicadelidos), himenóptera (abejas), hemiptera (chirimacha), dípteras (mosca y mosquito), orthoptera (langostas) y coleóptera (escarabajos) siendo este último orden de insectos donde existen más especies afectadas, existen muchas cepas de estos hongos que varían considerablemente en su virulencia y rango de hospederos.

Introducción La forma más usual de infección es por contacto a través de la cutícula del insecto y la inducción de la micosis es factible debido a que los conidios pueden germinar aún fuera de los hospederos.

Introducción Los medios de cultivo para hongos contienen sustancias nutritivas (fuentes de carbono, nitrógeno y sales minerales) necesarias para que puedan obtener energía, crecer y desarrollar adecuadamente. Estos requerimientos nutricionales pueden ser suplementados en cantidades adecuadas para lograr un máximo de crecimiento y esporulación, aun cuando debe tenerse en cuenta que estos requerimientos pueden ser diferentes para la obtención de biomasa miceliar o conidios.

Introducción Por lo tanto, las técnicas y procesos de producción más adecuados varían necesariamente para las diferentes especies y/o grupos de hongos. Así también, para su crecimiento y esporulación, es importante proporcionarles factores microambientales como temperatura, pH, tensión de oxígeno, humedad, etc.

Objetivo Contribuir al conocimiento de obtención de medios de cultivos optimizados que permitan la mayor esporulación masiva las Cepa PR-11 y TM de Beauveria sp como controlador biológico

Metodología Material Biológico: La cepa TM, aislada del coleóptero Metamasius hemipterus, recolectado en la localidad de Aimanchay, San Francisco-Tingo María-Huanuco, en estado adulto. La cepa PR-11, aislada de la langosta Schistocerca piceifrons peruviana, de la Provincia de Huamanga Ayacucho.

Metodología Medio de cultivo Optimización del medio: Se optimizo el Medio Czapeck utilizando como medio base la siguiente composición: Nitrato de sodio 2.00 g, fosfato dipotasico 1.00 g, sulfato de magnesio 0.50 g, cloruro de potasio 0.50 g, sulfato férrico 0.01 g, glucosa 30.00 g.

Metodología Diseño experimental: Está basado en los experimentos factoriales, donde: Los factores fueron los componentes del medio de cultivo, Con tres niveles para cada factor. Como se muestra en la siguiente tabla:

Metodología MEDIO CZAPECK 1 2 3 X1 nitrato de sodio 0,0200 0,0400 0,0800 X2 fosfato dipotasico 0,0100 X3 sulfato de magnesio 0,0050 X4 cloruro de potasio 0,0005 0,0010 0,0020 X5 sulfato férrrico 0,0001 0,0002 0,0004 X6 Glucosa 0,2000 0,4000 0,8000

Metodología   X1 X2 X3 X4 X5 X6 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

Metodología Inóculo Cada cepa en estudio fue sembrada en frascos con 50 mL de agar Czapeck en plano inclinado, e incubadas por 21 días en condiciones del laboratorio. Luego se agregó a cada frasco 20 mL de agua estéril con Tween al 1% para dispersar las esporas en la solución y a continuación se sembraron en viales conteniendo 5 mL de los 18 medios, cada medio con cuatro repeticiones. A los 21 días de incubación se realizó el contaje de esporas añadiendo 5 mL de agua estéril con Tween al 1%. Los inóculos de las cepas fueron de: 2.7 x 1E+08 esporas/mL para la cepa PR.11 y 3.3 x 1E+08 esporas/mL para la cepa TM.

Resultados En la siguiente tabla se muestra los resultados de los obtenidos de los 18 medios evaluados (Nº esporas x 1E+08):

Resultados X1 X2 X3 X4 X5 X6 PR11 TM czapeck 0,0200 0,0100 0,0050 0,0005 0,0001 0,2000 0,00 4,30 1 0,0020 0,0002 0,8000 12,00 5,40 2 0,0400 0,0010 0,0004 0,4000 5,10 14,90 3 9,60 8,80 4 1,90 8,90 5 6,00 21,20 6 7,60 7 3,60 8 1,50 2,70 9 0,80 10 0,60 4,60 11 1,20 2,80 12 0,0800 13 14 0,70 15 1,60 16 3,70 4,90 17 3,40 18

Resultados Los medios que dieron la mejor producción de esporas fueron: El medio número 2 para la cepa PR-11 y El medio número 6 para la cepa TM. su composición se indica en la siguiente tabla:

Resultados 2 6 7 X1 NO3Na X2 K2 HPO4 X3 SO4Mg2 X4 ClK X5 SO4Fe2 X6   X1 NO3Na X2 K2 HPO4 X3 SO4Mg2 X4 ClK X5 SO4Fe2 X6 Glucosa PR11 TM 2 0,0200 0,0050 0,0020 0,0002 0,8000 12,00 5,40 6 0,0400 0,0005 0,4000 6,00 21,20 7 0,0100 0,0010 1,90 7,60

Resultados Comparando la producción de esporas con la concentración de sales del medio original (Medio 7), observamos que: En el medio 2, la cepa PR-11 aumenta su producción en 632 % mientras que en la cepa TM sólo aumenta en un 71 %. La mejor producción de esporas en la cepa de TM la obtiene en el medio 6 con un aumento del 279%. Mientras que en la cepa PR-11 se obtuvo un aumento del 316%.

Conclusión La cepa PR-11 muestra el mejor porcentaje de producción de esporas en los medios 2 (632%) y 6 (316%) con respecto a la cepa TM-

Gracias por su atención