OPERON LAC
OPERON LAC “Operón”: Es una unidad de transcripción: genes estructurales regulados por un promotor y un operador . Ejemplo: Los genes involucrados en el uso de la Lactosa como fuente de carbono, se encuentran agrupados y codifican para enzimas que participan en la misma vía metabólica. (También los genes involucrados en síntesis o degradación de amino ácidos)
OPERON LAC
COMPOSICIÓN. a) Genes estructurales (en tándem). gen lac Z : β-galactosidasa el gen lac Y : permeasa del galactósido. el gen lac A: acetiltransferasa de tiogalactósido. Se transcriben desde un promotor común en un mRNA policistrónico, al traducirse da lugar a las tres enzimas.
COMPOSICIÓN b) Promotor Sitio donde la polimerasa de RNA se une al DNA antes del inicio de la transcripción.
COMPOSICIÓN. c) Operador Adyacente o traslapado con el promotor, sitio de unión de la proteína conocida como REPRESOR. d) Gen Regulador. Gen lac I : La expresión de los genes estructurales es controlada por un gen regulador específico. Puede estar cerca o lejos de los genes bajo regulación. El gen regulador codifica para una proteína, el REPRESOR.
El REPRESOR http://mol-biol4masters.masters.grkraj.org/html/Gene_Expression_I5A-Lactose_Operon.htm
En este tipo de operador inducible, el REPRESOR sólo puede unirse al DNA en ausencia de lactosa, la que funciona como un INDUCTOR.
CONTROL POSITIVO POR cAMP. La concentración de cAMP en las células se relaciona con la presencia de glucosa en el medio: ↑Glucosa, ↓ cAMP. La proteína CAP sola es incapaz de unirse al DNA, pero el complejo cAMP-CAP sí reconoce y se une a un sitio especifico de la región de control de LAC, aumentando la afinidad de la región promotora por la RNA polimerasa, lo que estimula la transcripción del Operón. La presencia del complejo cAMP-CAP es necesaria para la transcripción del Operón, aun cuando la lactosa esta presente y el represor esté inactivo.
Experimento E. coli en medio mínimo Medio mínimo A Glu 2% B Lac 2 % C Glu + Lac 2 % D Glu 2 % E Glu + Lac 2 % 15 min ½ tiempo + Lac 2 % 7.5 min
1.- Centrifugar a 10,000 rpm, decantar sobrenadante 2.- Resuspender bacterias en 250 µL de amortiguador Z 3.- Añadir 25 µL de CHCl3 + 12.5 µL SDS 0.1 % 4.- Añadir 50 µL de ONPG, Incubar 2 min. TA 5.- Añadir 125 µL Na2CO3 1 M 6.- Observar color