Hemograma

Hemograma Conjunto de determinaciones que ofrecen información sobre los procesos fisiológicos de la persona, reflejan la capacidad del organismo para reaccionar frente a la enfermedad. sirve como indicador del progreso del paciente en estado patológico interviene en el diagnóstico y el seguimiento la prevención de los procesos infecciosos.

Determinaciones del hemograma Pruebas Cuantitativas: Recuento celular(G. blancos y glóbulos rojos, hematocrito, concentración de hemoglobina, índices hematimétricos) Pruebas Cualitativas: morfología celular(G. blancos, g. rojos y plaquetas)

Recuento de hematíes o Glóbulos Rojos: numero de eritrocitos por volumen de sangre. Recuento de Leucocitos o Glóbulos Blancos: numero de leucocitos por volumen de sangre. Hematocrito: porcentaje que ocupa la masa eritrocitaria con respecto al volumen total de la sangre. Concentración de Hemoglobina Indices eritrocitarios: Proporcionan información sobre el tamaño y la concentración de Hb de los hematíes. VSG o Eritrosedimentación Formula Leucocitaria: aquí se determina el porcentaje de cada tipo de leucocito por la observacion de 100 células de la serie de leucocitos contados(o 50 o 200celulas según el caso).

IMPORTANTE Para la realización del Hemograma se utiliza sangre total con EDTA como anticoagulante. Se utiliza una gota de anticoagulante para mínimo 2,5 mL de sangre

PRUEBAS CUANTITATIVAS

Hematócrito El hematocrito (Hto) es la relación existente entre el volumen de eritrocitos y el volumen total de sangre, expresado como porcentaje. depende parcialmente de la concentración de hemoglobina(Hb pero independientemente de la Hb, su valor también varia con el volumen plasmático.

Procedimiento (Microhematócrito) - Micrométodo Llenar dos tubos capilares(no heparinizados) hasta alrededor de las 3/4 partes con sangre anticoagulada. Sellar el extremo del capilar con el anillo coloreado con arcilla no absorbente. Equilibrar los capilares en la centrifuga con los extremos obturados hacia la periferia. Cerrar la tapa de la centrifuga. Centrifugar por 5 min entre 10.000 y 15.000 rpm. Hacer la lectura del hematócrito mediante un ábaco. No incluir la capa de blancos y plaquetas. Los valores de hematócrito de ambos capilares deben coincidir con una diferencia de menos de 1%.

Macrohematócrito: se realiza con tubos llamados de Wintrobe y se centrifuga por media hora a 2500 rpm (muy poco utilizado) El rango de referencia del Hto varia con la edad, sexo, raza, nutrición, embarazo,consumo de medicamentos. En los fumadores se encuentra aumentado.

Lectura del Hematocrito

Factores de Error Las fugas de muestra al no quedar bien sellado los capilares, y perderse mayor proporción de células que de plasma. Anticoagulantes líquidos provoca un error por dilución de la muestra. En muestras capilares no descartar la primer gota, hemodilución. En muestras de sangre venosa, la liga colocada durante un cierto tiempo produce hemoconcentración. La lectura no inmediata de los capilares, provoca que el sedimento de hematíes vaya tomando forma de bisel si el capilar permanece en posición horizontal.

Hemoglobina Fundamento Hb + ferricianuro de K metaHb Método de la Cianometahemoglobina Fundamento Hb + ferricianuro de K metaHb MetaHb + cianuro de K cianometaHb

Procedimiento 1. Agregar 20 μl de sangre a 5,0 ml de reactivo de cianometahemoblobina. 2. Enjuagar la pipeta por completo con el reactivo para no perder muestra. 3. Tapar y mezclar bien por inversión. Dejar en reposo 10 minutos a Tº ambiente para permitir la conversión completa de Hb a CianometaHb. 4. Luego leer la absorbancia en el espectrofotómetro a 540 nm, usando el reactivo como blanco. 5. La concentración se puede obtener a partir de la curva de calibración o usando un factor que se obtiene a partir del estándar.

Curva de Calibración de la Hemoglobina Tubo Reactivo de Drabkin Estándar/desconocido 1 5ml - 2 5ml 20ul 3 10ml 20ul 4 15ml 20ul 5 20ml 20ul 6 5ml 20ul (desconocido)* 7 5ml 20ul (desconocido)* *El desconocido se realiza por duplicado.

Causas de Error Errores de extracción Coagulación parcial de la sangre. Empleo de pipetas automáticas descalibradas u otras pipetas sucias o húmedas. No eliminación del exceso de sangre adherida a las paredes externas de la puntera antes de introducirlo en el reactivo. Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o vencido Lectura antes del tiempo necesario para la completa transformación de la Hb en HiCN. Empleo de instrumentos no calibrados Cubetas sucias o deterioradas

Recuento Celular La que se utiliza normalmente es la cámara de Neubauer que está formada por un retículo que es un cuadrado grande de unos 3 mm de lado por lo que su superficie es de 9 mm2. La superficie total está dividida en 9 cuadrados de 1 mm de lado. Los cuatro cuadrados de las esquinas están divididos en 16 cuadrados medianos y el cuadrado central está dividido en 25 cuadrados medianos. Cada uno de ellos está dividido en 16 cuadrados pequeños. Por lo tanto, en el cuadrado central tendremos 400 cuadrados pequeños(recuento de glóbulos rojos).

Dilución en Tubo Dilución en Pipeta de thoma para cada uno de los tipos celulares, g. rojos y g. blancos.

Recuento de Globulos Rojos Consiste en hacer el recuento en una dilución de sangre entera anticoagulada. Líquido diluyente: solución fisiológica. Cargar 3,98 ml de Liquido de dilución isotónico para evitar la lisis de los hematíes en un tubo de ensayo pequeño Agregar 0,02ml(20 µl) de sangre entera previamente homogeneizada Dejar en reposo por 10 minutos Cargar la cámara de neubauer. El recuento de hematíes se realiza en el cuadrado central, se eligen 5 de los cuadrados que se encuentran subdivididos en 16 cuadrados pequeños

Área contada Los valores normales varían con la edad y el peso. Nº de hematíes/mm3 = células contadas en 5 cuadrados X factor de dilución X 10 Área contada Área: 1/5 mm2, porque se cuentan 80 cuadraditos de 400. Los valores normales varían con la edad y el peso.

Recuento de Glóbulos Blancos a. Cargar 0.38ml de reactivo de Turk (Esta solución contiene acido acético al 1 % en agua destilada y el agregado de una punta de espátula de azul de metileno) b. 20 µl de muestra bien homogeneizada c. Dejar en reposo unos minutos. d. Cargar la cámara a ambos lados. e. contar inmediatamente.

Para realizar el cálculo se utiliza la fórmula: Se cuentan los cuadrados mas grandes. El recuento se realizará al microscopio en 10X. Para realizar el cálculo se utiliza la fórmula: Nº de leucocitos/mm3= células contadas en 4 cuadrados X 10 X factor de dilución Área contada(4mm2) OBS: La variación entre los 4 cuadrantes no debe superar las 10 células. En caso contrario debe cargarse nuevamente la cámara.

Índices Eritrocitarios o Índices Hematimétricos Volumen Corpuscular Medio Hemoglobina Corpuscular Media Concentración de Hb corpuscular media.

Volumen Corpuscular Medio (VCM) Volumen promedio de los eritrocitos, expresado en fentolitros(10 -15) VCM= Hematocrito x 10 = 45x 10 = 90 fL Glóbulos rojos 5 Rango de Referencia: 80 – 94 fL

Hemoglobina Corpuscular Media(HCM) Peso medio de la hemoglobina en un hematie expresado en picogramos. (10-12) HCM= Hemoglobina x 10 Glóbulos rojos Rango de Referencia: 28 – 32 pg

Concentracion de Hb corpuscular media. (CHCM) Concentración media de hemoglobina en cada eritrocito en g/dL CHCM= Hb(g%)x 100 Hto(%) Rango de Referencia: 32 – 37 g/dL En células hipocromicas: Menor a 32 g/dL

Velocidad de Sedimentación Globular (VSG) O Eritrosedimentación cantidad de mm que los eritrocitos sedimentan en 1 hora, y es afectada x los eritrocitos, el plasma, y factores mecánicos y técnicos. Homogeneizar la muestra con EDTA. Llenar la pipeta de Eritrosedimentacion(Westergren) con la muestra hasta la marca del O(cero) con una propipeta Colocar la pipeta en el soporte de eritrosedimentación y anotar la hora. A las una hora leer cuantos mm sedimento la porción globular

Causas de error la temperatura altera la VSG e incluso una ligera inclinación de la pipeta Los transtornos hemáticos como cell falsiformes y los esferocitos impiden la formación de los rodillos por lo tanto disminuye la VSG. Los oxalatos y la heparina hace q los eritrocitos se contraigan y produce valores elevados falsos de VSG.