La ruta oxLDL/LOX-1 previene la disrupción fenotípica inducida por TNF-α en miofibroblastos cardíacos Díaz Alvarado H., Reyes J., Parra E., Villa M., Figueroa D., Leiva S., Camus V., Inostroza E., Ceballos G., García L. Laboratorio de Transducción de Señales Moleculares, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de Chile. INTRODUCCIÓN En enfermedades inflamatorias crónicas los niveles de TNF-α y LDL oxidado (oxLDL) se encuentran elevados y lleva al desarrollo de fibrosis cardiaca, donde los miofibroblastos cardiacos (CMF) juegan un rol clave, sin embargo los efectos de TNF- α y oxLDL sobre el fenotipo del CMF es desconocido. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto del oxLDL y TNF-α sobre la morfología del CMF in vitro. MATERIALES Y MÉTODOS Se cultivaron CMF de rata adulta. Estos fueron estimulados con TNF- α y oxLDL, luego, evaluamos los niveles de α-SMA (un marcador de diferenciación), LOX-1 (receptor de oxLDL) y NADPH oxidasa (NOX; elemento río abajo de la vía oxLDL/LOX-1) mediante Western Blot. La morfología de los CMF fue observada por inmunofluorescencia en respuesta a los estímulos. Además, utilizamos siRNA para silenciar LOX-1 y evaluamos los niveles de α-SMA. RESULTADOS TNF-α indujo una disrupción fenotípica y disminución en los niveles de LOX-1 y α-SMA en CMF. oxLDL indujo la activación de NOX y un incremento en los niveles de LOX-1. Ambos procesos fueron inhibidos por TNF-α. oxLDL atenuó la disrupción fenotípica inducida por TNF-α. Además, el silenciamiento de LOX-1 inhibió el incremento de α-SMA en el CMF. Figura 2. oxLDL (20 µg/mL) induce la activación de NADPH oxidasa (NOX2) y esta es inhibida por TNF-α. Los MFC fueron estimulados con oxLDL y TNF-α en un rango de tiempo de 5 a 30 min y la activación de NOX2 fue medida como la razón entre p47 fosforilado y p47 total mediante Western Blot (n=3). Análisis estadístico: ANOVA de una vía y post-test Tukey. * p<0,05 vs. control; *** p<0,001 vs. control; ## p<0,001 vs CMF estimulados con oxLDL. Figura 3. La disrupción fenotípica inducida por TNF-α es prevenida por oxLDL en MFC. Inmunofluorescencia contra α-SMA (verde) y LOX-1 (rojo) en MFC estimulados durante 24 horas con TNF-α y oxLDL. Magnificación total: 200X CONCLUSIONES La vía oxLDL/LOX-1 podría jugar un rol clave sobre fenotipo de los CMF, sugiriéndola como un nuevo blanco farmacológico en el tratamiento de la fibrosis cardiaca. REFERENCIAS Ishigaki T, Ohki I, Utsunomiya-Tate N, Tate SI, Chimeric structural stabilities in the coiled-coil structure of the NECK domain in human lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor 1 (LOX-1), J Biochem. (2007), 141(6): 855-866 Taye A, El-Sheikh AA, Lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor 1 pathways, Eur J Clin Inv (2013), 43: 740-745. Xin M, Olson EN, Bassel-Duby R, Mending broken hearts: cardiac development as a basis for adult heart regeneration and repair, Nat Rev Mol Cell Biol (2013), 14(8):529-41 Driesen RB, Nagaraju CK, Abi-Char J, Coenen T, Lijnen PJ, Fagard RH, Sipido KR, Petrov VV, Reversible and irreversible differentiation of cardiac fibroblasts, Cardiovasc Res. (2014), 101(3):411-22 Figura 1. TNF-α induce disminución de los niveles de LOX-1 y α-SMA en CMF en un estilo independiente de TGF-β. Los CMF fueron estimulados con TNF-α, en presencia y ausencia del inhibidor del receptor de TGF-β1 SD-208 por 24 horas y los niveles de LOX-1 y α-SMA fueron medidos mediante Western Blot (n=4). Análisis estadístico: ANOVA de una vía y post-test Tukey. *: p<0,05 vs. control; **: p<0,01 vs. control.