Correo-E: david.silvamr@uanl.edu.mx ESTUDIO DE PLANTAS DEL NORESTE DE MÉXICO CON ACTIVIDAD ANTIHERPÉTICA Y CITOTÓXICA. David Arturo Silva Mares1, Verónica Rivas Galindo1, Jonathan Pérez Messeguer1, Noemí Waksman de Torres1, Ricardo Salazar Aranda1 Luis A. Pérez lopez1 Ernesto Torres López2. Universidad Autónoma de Nuevo León, Facultad de Medicina, 1Departamento de Química Analítica. 2Departamento de Inmunología. Madero y Dr. Aguirre Pequeño Col. Mitras Centro S/N Monterrey, N.L. México. C.P. 64460 Correo-E: david.silvamr@uanl.edu.mx INTRODUCCIÓN: Herpes es una enfermedad emergente, causada por la infección del virus herpes simplex tipo 1 (VHS-1) y tipo 2 (VHS-2) en células de tejido mucoso, tanto en boca como en genitales. Existen para su tratamiento medicamentos análogos de la guanina como aciclovir. En los últimos años se ha observado una emergente aparición, de cepas resistentes a estos fármacos en pacientes inmunocomprometidos, además se reporta que VHS está asociado a cáncer, particularmente en área genital, esto denota la importancia de obtener un compuesto, que pueda ser usado para el tratamiento de ambas enfermedades. En México, es amplio el conocimiento y manejo de plantas medicinales1, estas plantas son conocidas por ser fuente de nuevos medicamentos, con diversas actividades terapéuticas como la antiherpética. Dentro de estas plantas de uso popular Juglans mollis (Juglandaceae), Persea americana (Lauraceae) Hamelia patens (Rubiaceae), Salvia ballotaeflora, Salvia texana (Lamiaceae), Ceanothus coeruleus (Rhamnaceae), Chrysactinia mexicana (Asteraceae) y Clematis drummondii (Ranunculaceae) se encuentran comúnmente en el noreste de México, estas plantas fueron seleccionadas en base a criterios quimiotaxonómicos y antecedentes etnobotánicos, para investigar su actividad citotóxica y antiviral contra VHS-1 y VHS-2. MATERIALES Y MÉTODOS: 1.- Se realizaron extracciones de diferentes plantas del Noreste de México Ambiente de nitrógeno Colecta de plantas Lavado y secado Molido Extracción Evaporar solvente Almacenar 4˚C 2.-Se determinó in vitro la concentración citotóxica media (CC50) de cada extracto con el ensayo de 3-(4.5-dimeltiltiazol-2-yl)-2.5-difeniltetrazolio bromuro (MTT) en células Vero y HeLa. 1x105 células Vero o HeLa *Agregar extractos 125, 250, 500 y 1000µg/mL CC50 = Conc. requerida para reducir vialidad Celular en 50 % Incubación 72 hrs 20µL MTT 5 mg/mL Incubación 180 min 200µL DMSO Lectura abs. a 570 nm. % Viabilidad = Abs cel tratadas x 100 Abs control (-) *Control – (Solvente) y Control de células IC50 = Reducción de UFP a 50% 3.-Se evaluó la actividad antiherpética in vitro de cada extracto, determinando la concentración inhibitoria media (IC50) contra VHS-1 y VHS.2 1x105 células Vero por pozo Infectar con100 UFP del stock viral Incubación 1 hr * DMEM + IgG al 0.32% + extractos 125, 250, 500 µg/mL Incubación 72 hrs Fijar c/metanol teñir c/Giemsa 10min *Control + (aciclovir) Control – (Virus) y Control de células 4.-Se determinó el índice de selectividad (IS) mediante la relación CC50/IC50. RESULTADOS Y DISCUSIÓN: Se evaluó la citotoxicidad de los diferentes extractos in vitro, en células Vero y HeLa por el método de MTT. Varios extractos mostraron actividad contra células Vero con CC50 >2000 µg/mL. S. ballotaeflora presentó la mayor citotoxicidad en células Vero y HeLa, con CC50 de 234 y 189 µg/mL respectivamente. La actividad antiherpética de los extractos se evaluó por el método de reducción de placas. S. ballotaeflora exhibió la mayor actividad, con IC50 de 31 y 16 µg/mL para VHS-1 y VHS-2 respectivamente. J. mollis presentó los mejores valores de IS >26 y >15 para VHS-1 y VHS-2 respectivamente. S. ballotaeflora presentó la mayor citotoxicidad contra células Vero, lo cual concuerda con lo reportado por Silva en el 2013, además esta planta presentó la mayor actividad contra células HeLa, sin embrago estos valores se consideran poco interesante en la actividad anticancerígena, por lo que es importante continuar con la evaluación de la actividad citotóxica, de esta plantas contra otras líneas celulares de cáncer, con la intención de definir alguna propiedades anticancerígena. Nuestros resultados mostraron que J. mollis no contaba con el mejor IC50 pero si con el mejor IS, solo seguido de S. ballotaeflora. Según la literatura, los extractos crudos con IS >2 indican una actividad específica contra VHS2. De acuerdo con los resultados obtenidos, todas las plantas evaluadas en este trabajo, cuentan con una actividad antiherpética específica, por lo que es importante llevar a cabo, el aislamiento biodirigido de los compuestos responsables, de dicha actividad en estas plantas, así como el mecanismos de acción por lo que actúan estos compuestos. Tabla 1 Actividad antiherpética y citotóxica de extractos de plantas. Plantas Solvente de extracción CC50 Vero (±SD) µg/mL HeLa (±SD) µg/mL IC50 VHS-1 (±SD) µg/mL VHS-2 (±SD) µg/mL IS HeLa IS VHS-1 IS VHS-2 J. mollis MeOH >2000 (ND) 837 (51) 76 (8) 126 (2) >2.3 >26.3 >15.8 P. americans 1,724 (301) 620 (32) 341 (35) >500 (ND) 2.7 5.0 <3.4 H. patens 1,450 (78) 212 (26) >1 >4 >9.4 S. texana MeOH agua 90:10 545 (55) 280 (17) 72 (9) <1 1.9 7.5 S. ballotaeflora 234 (21) 189 (22) 31 (2) 16 (0.8) 1 14.6 C. coeruleus Acetato de etilo 1,014 (318) 850 (113) 186 (15) 265 (27) 5.45 3.8 C. mexicana Éter etílico 170 (14) 340 (22) ND >11.7 >5.8 C. drummondii >1000 (ND) 457 (31) 255 (36) >4.3 >7.8 Cada experimento fue realizado por triplicado (ND) No determinado, (SD) Desviación estándar CONCLUSIONES: Con estos resultados podemos concluir que las plantas estudiadas en este trabajo presentan actividad antiherpética. Es interesante continuar con la evaluación de la actividad citotóxica, de esta plantas contra otras líneas celulares de cáncer. Es importante continuar con el aislamiento biodirigido de compuestos con actividad antiherpética, a partir de estas plantas. Es importante investigar si el mecanismo de acción de estas plantas, es diferente al de los fármacos ya existentes en el mercado, para el tratamiento de herpes simplex. Este es el primer reporte de actividad antiherpética de J. mollis, H. patens, S. texana, S. ballotaeflora, C. coeruleus, C. mexicana and C drummondii. REFERENCIAS: 1. Silva-Mares D, Torres-López E, Rivas-Estilla A-M, Cordero-Perez P, Waksman-Torres N, Rivas-Galindo V-M. 2013. Plants from northeast Mexico with anti-HSV activity. Nat Prod Commun 8:297–298. 2. Silva-Mares D, Torres-Lopez E, Rivas-Galindo VM. 2016. Antiherpetic Plants: A Review of Active Extracts, Isolated Compounds, and Bioassays. Nat Prod Commun 11:557–566.