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Transcripción de la presentación:

INMUNOABSORCION UNIDO A ENZIMAS ELISA INDIRECTO ELISA EN SANDWICH WESTERN – BLOT INMUNOBLOT INMUNOHISTOQUIMICA Es la técnica más utilizada para cuantificar casi cualquier proteína soluble en la mayor parte de los fluidos corporales Determinación cuantitativa de un antígeno o un anticuerpo por medio de una molécula indicadora, la cual se encuentra unida covalentemente a una enzima.

ELISA INDIRECTO Es la modalidad a utilizar cuando lo que se quiere es cuantificar la presencia de anticuerpos específicos en suero.

1.Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Ags específicos. 2.Lavado con solución salina Tween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente o no fijados. 3.Adición de Acs marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado. 4.Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan reaccionado.

5.Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. 5.Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

APLICACIONES CLÍNICAS:  Enfermedades producidas por parásitos  Toxoplasmosis, Triquinosis, Tripanosomas, etc.  Enfermedades producidas por Micoplasmas  Enfermedades producidas por bacterias  Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos, Salmonelas, etc.  Enfermedades producidas por virus  Enfermedad de Newcastle, Peste porcina, Rotavirus, artritis vírica, Leucemia, etc.  Otras aplicaciones  Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona..)  Cuantificación de inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA)  Inmunopatología (Factor reumatoide, Inmunocomplejos circulantes)

ELISA EN SANDWICH Cuan lo que se va a cuantificar es una proteína sérica (no un anticuerpo). Se utiliza por ejemplo para cuantificar una citocina

WESTERN – BLOT Se realiza sobre soportes solidos (papeles de nylon o nitrocelulosa) sobre los que se han transferido e inmovilizado proteínas antigénicas previamente separadas por electroforesis en geles de acrilamida

INMUNOBLOT Esta técnica se realiza para el estudio de diferentes auto – anticuerpos, o para la detección de Ig E especifica frente a diferentes alérgenos.

INMUNOHISTOQUIMICA

INMUNOFLUORESCENCIA INMUNOFLORESCENCIA INDIRECTA (IFI) CITOFLUOROMETRÍA DE FLUJO

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