Expresión de proteínas y mRNA Lic. María Mercedes Tiscornia Cátedra de Biología Molecular y Genética - 2012.

Presentación del tema: "Expresión de proteínas y mRNA Lic. María Mercedes Tiscornia Cátedra de Biología Molecular y Genética - 2012."— Transcripción de la presentación:

1 Expresión de proteínas y mRNA Lic. María Mercedes Tiscornia Cátedra de Biología Molecular y Genética - 2012

2 Dogma central de la biología molecular

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4 ¿Qué realizamos en el práctico, de la clase pasada, donde trabajamos con proteínas?

5 SDS - PAGE

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7 Western - Blot  La detección de la proteína por medio de anticuerpos que reconocen la secuencia primaria, requiere la desnaturalización de la misma.  Primeramente, se realiza una SDS – PAGE.  Luego, se realiza una transferencia a un soporte de sólido (filtro de nitrocelulosa o nylon).  La transferencia se realiza por la aplicación de un campo eléctrico o por capilaridad.  Se expone la membrana a un anticuerpo específico de la proteína a reconocer que será detectado por otro anticuerpo marcado.

8 Anticuerpos-Antígenos Los anticuerpos son proteínas producidas en los vertebrados en respuestaa la exposición a estructuras extrañas conocidas como antígenos. Las sustancias extrañas en el organismo y que son reconocidas por los anticuerpos de forma específica se denomina antígeno.

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11 EJEMPLO DE INTERPRETACIÓN Western blot for p27/Kip1 on AtT-20 cell lysates treated with DMSO (CT), 1 nmol/L octreotide plus DMSO (Oct), 1 nmol/L rapamycin, and 1 nmol/L octreotide plus 1 nmol/L rapamycin for 24 h (A); SHP-1dn– transfected (B) and Myr-Akt–transfected (C) AtT-20 cell lysates treated with DMSO (CT), 1 nmol/L octreotide plus DMSO (Oct), and 1 nmol/L rapamycin; and AtT-20 cell lysates treated as in B and C in the presence of the GSKβ inhibitor SB415286 (14 μmol/L; D). Cerovac et al., 2010.

12 RT-PCR

13 Interpretación de RT-PCR

14 Real Time-PCR