ESTUDIO DE LA VARIABILIDAD GENÉTICA ORIGINADA EN EL CULTIVO IN VITRO DE CRISANTEMO Yaser Abul Enain* Directora: MA Revilla Bahillo Área Fisiología Vegetal (B.O.S.) INTRODUCCIÓN El crisantemo (Dendrathema grandiflora) es una de las plantas más importantes económicamente dentro del sector ornamental. Se produce comercialmente mediante técnicas de cultivo in vitro. La variación somaclonal puede ser de gran utilidad para la obtención de nuevos cultivares y un inconveniente para el mantenimiento de los genotipos. Los principales factores que intervienen en el proceso de variación somaclonal son: el genotipo, la vía de regeneración, el tipo de explanto, la duración del cultivo y la composición del medio de cultivo. En principio, el cultivo de meristemos sería el explanto mas adecuado para propagación clonal, crioconservación y obtención de protoplastos.   En este trabajo se utilizarán tres variedades de crisantemo (Davis, Red Reagan y Refocus), las cuales han sido ya introducidas in vitro a partir del cultivo de meristemos en medio MS semisólido (Murashige y Skoog, 1962) suplementado con fitohormonas. Los objetivos de este trabajo: Comprobar que no se producen alteraciones genómicas durante el proceso de crioconservación de ápices de tallos ("meristemos") para que este método pueda utilizarse como una alternativa a la propagación vegetativa en la conservación de los genotipos para su posterior uso. Se analizarán con marcadores moleculares (AFLPs, amplified fragment length polimorphism) las plantas recuperadas después de aplicar los distintos procedimientos de crioconservación: BIBLIOGRAFÍA Binding et al. Botanica Acta (1988) 101:233-239 Hitmi, Sallanon, and Barthomeuf. Plant Cell Rep (1997) 17: 60-64. Hitmi, Sallanon, and Barthomeuf. Cryo-Letters (1999) 20: 45-54. Lindsay, and Ledger. Plant Cell Rep (1993) 12: 278-280. Murashige et al. Physiolplant (1962) 15: 473-497. Sauvadet, Brochard, and Boccon-Gibod. Plant Cell Rep (1990) 8: 692-695.   Regenerar plantas a partir de protoplastos y analizar la variación genética producida. El desarrollo directo de meristemos caulinares a plantas y la regeneración de plantas a partir de protoplastos se consideran a priori como las rutas que presentan menor y mayor riesgo de variación, respectivamente. En crisantemo se han publicado muy pocos trabajos sobre regeneración de plantas a partir de protoplastos. Sauvadet et al (1990) regeneraron plantas de crisantemo a partir de protoplastos de hojas y Lindsay y Ledger (1993) a partir de meristemos. En el primer caso se logró regenerar planta a partir de un único clon y en el segundo caso no se menciona el cultivar utilizado por lo que es evidente una dependencia de genotipo. Utilizaré la técnica de “streaky culture lenses” descrita ( Binding et al, 1988) y modificado en trabajos previos en nuestro laboratorio. Se analizarán con marcadores moleculares (AFLPs, amplified fragment length polimorphism) las plantas regeneradas. Proyecto *Becario AECI Métodos de crioconservación encapsulación + deshidratación vitrificación encapsulación+ vitrificación Planta madre Ápices Transferencia a medio de crecimiento Solución de vitrificación Crioviales Cultivo en agar Exposición a -160Cº Suspensión de protoplastos 1ª división Lavado de la solución de vitrificación Al aire 10 s. Inmersión en NL En agua 1 min. encapsulación+ vitrificación (Hitmi et al, 1997) vitrificación (Hitmi et al,1999) Callo y regeneración Microcolonia Análisis genéticos (AFLPs) *Becario: AECI Proyecto: AGL 2000-1295