Evaluación farmacológica y estudio químico biodirigido del "tepehuaje" Lysiloma acapulcensis (Kunth) Benth Introducción La Organización Mundial de la Salud (OMS) reporta que durante el año las enfermedades infecciosas ocuparon el primer lugar en causas de muerte a nivel mundial, con un 33%. Desglosándose de la siguiente manera; en primer lugar el paludismo, seguidas por las infecciones agudas de las vías respiratorias inferiores, la tuberculosis, diarreas y el VIH-SIDA. La actual resistencia de los microorganismo y a los efectos secundarios de los actuales antimicrobianos, ha obligado a los investigadores en el área a buscar nuevos medicamentos a partir de productos naturales, dentro de los cuales las infusiones, compresas, etc., es una práctica muy extendida en el tratamiento de diversos padecimientos, incluyendo aquellos en que está involucrado un proceso infeccioso. Entre las plantas medicinales más frecuentemente empleadas por la población de Morelos se encuentra la especie Lysiloma acapulcensis. Objetivo Evaluar la actividad antimicrobiana, y realizar un estudio químico biodirigido, de la especie vegetal Lysiloma acapulcensis. Metodología Recolección e identificación de la planta La recolección de la especie vegetal se realizó en su hábitat natural en el municipio de Tétela del Volcán del Estado de Morelos. Se preparó un ejemplar de herbario del Instituto Nacional de Antropología e Historia de Morelos (INHAM-2002). Preparación y obtención de extractos La corteza seca y molida fue extraída secuencialmente dejando macerar el material vegetal con n-hexano durante 24 a 48 horas, el extracto se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida en un rotavapor, (el proceso se repitió en tres ocasiones). El mismo procedimiento se realizó con cloroformo y finalmente metanol. Se determinó el rendimiento de los extractos (Tabla 1). Fraccionamiento del extracto El extracto de cloroformo fue separado en fracciones menos complejas mediante la aplicación de técnicas cromatográficas en columna, usando silica gel como fase estacionaria y mezclas de disolventes de polaridad creciente, formadas por n-hexano y la adición de acetona como fase móvil. La homogeneidad y composición de las fracciones y compuestos puros fue monitoreada por cromatografía en placa fina, usando luz UV y/o una solución de sulfato cérico amoniacal en ácido sulfúrico 2N como reveladores. Bioevaluación antimicrobiana Se realizó un ensayo antimicrobiano de los extractos obtenidos mediante el método de doble dilución seriada en agar, y se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI). Además se realizó la bioevaluación de las fracciones mediante bioautografía directa. Para la CMI, cada extracto se disolvió en agua y se prepararon diluciones seriadas dobles, que se adicionaron al medio de cultivo en cajas petri y el rango de dilución ensayada estuvo comprendido entre mg/mL. Las cepas de microorganismos empleadas para las pruebas antimicrobianas fueron: Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 1. Elucidación estructural Para la identificación y elucidación estructural de los compuestos puros se utilizaron técnicas espectroscópicas y espectrométricas. Resultados Los tres extractos ensayados presentaron actividad antibacteriana (CMI de 2-8 mg/mL). Los extractos de cloroformo y metanol presentaron actividad antifúngica con valores de CMI de 4-8- mg/mL (Tabla 1). El fraccionamiento químico biodirigido del extracto de cloroformo permitió identificar 8 fracciones con actividad antimicrobiana, de las cuales se aislaron, purificaron e identificaron 4 triterpenos, 6 esteroles y una cera (Figura 1), a los cuales se les realizó una valoración antimicrobiana como compuestos puros (Tabla 2). a = H; n-Hexano, C; Cloroformo, M; Metanol. b = Sa; Staphylococcus aureus, Ec; Escherichia coli, St; Salmonellas typhi, Pm; Proteus mirabilis, Sf; Streptococcus faecalis, An; Aspergillus niger, Tm; Trichophyton mentagrophytes, Tr; T. rubrum, Ca; Candida albicans Rojas B. Ma. Gabriela 1, Abarca V. Rodolfo 1, Ríos G. Ma. Yolanda 2, Navarro G. Víctor M. 1 1 Laboratorio de Microbiología. Centro de Investigación Biomédica del Sur, IMSS, Xochitepec, Morelos, México. 2 Laboratorio de Productos Naturales del CIQ-UAEM, Cuernavaca, México. Conclusiones Los extractos orgánicos de L. acapulcensis poseen actividad inhibitoria del desarrollo microbiano in vitro, lo cual se correlaciona con su uso médico tradicional para el tratamiento de infecciones. Los productos puros aislados presentaron valores de MIC mayores a 1 mg/mL, por lo que se deduce que la actividad antimicrobiana del extracto de cloroformo integro, es debida probablemente al sinergismo de los compuestos en su conjunto, o a la presencia de otros compuestos no identificados. El trabajo fitoquímico desarrollado permitió la obtención y elucidación estructural de 11 compuestos presentes en la fracción bioactiva del extracto de cloroformo, los cuales pueden ser utilizados para la estandarización de los extractos de esta importante planta medicinal. Se continuará el estudio fitoquímico para detectar los productos activos. Candida albicans10231Streptococcus faecalis29212 Staphylococcus aureus29213Aspergillus niger10335 Escherichia coli25922Trichophyton mentagrophytes28185 Salmonella typhi06539T. rubrum28818 Proteus mirabilis43071 Tabla 1. Valoración antimicrobiana y rendimiento de Lysiloma acapulcensis (Kunth) Benth Disolvente a Rendimiento CMI mg/mL Microorganismos b SaEcStPmSfAnTmTrCa H0.13%8>8 8 C0.16% >8 M8.86% Extracto de cloroformo A Friedelina Acetato de lupeilo Mezcla de acil esteroles * Oleato de 3-  -sitosterilo * Oleato de 3-  -estigmasterilo * Oleato de 3-  -campesterilo B Friedelina C Friedelanol D Lupeol E E1E2E3E4 Triacontanol Mezcla de esteroles *  -Sitosterol * Estigmasterol * Campesterol E5 Mezcla de esteroles *  -Sitosterol * Estigmasterol * Campesterol E6E7 FG Tabla 2. Valoración antimicrobiana de los compuestos aislados del extracto de cloroformo de Lysiloma acapulcensis (Kunth) Benth Mezcla y compuestos aislados CMI mg/mL Microorganismos a SaEcStPmSfAnTmTrCa Acetato de lupeilo>1 Mezcla de acil esteroles *Oleato de 3-  -sitosterilo *Oleato de 3-  -estigmasterilo *Oleato de 3-  -campesterilo ND Mezcla de esteroles *  -sitosterol * Estigmasterol * Campesterol >1 Friedelanol>1 Friedelina>1 Lupeol>1 Triacontanol>1 a = Sa; Staphylococcus aureus, Ec; Escherichia coli, St; Salmonellas typhi, Pm; Proteus mirabilis, Sf; Streptococcus faecalis, An; Aspergillus niger, Tm; Trichophyton mentagrophytes, Tr; T. rubrum, Ca; Candida albicans Figura 1. Diagrama del fraccionamiento del extracto de cloroformo, del cual se identificaron 8 grupos de fracciones con actividad antimicrobiana (señalados de color rojo), aislándose de estos 4 triterpenos, 6 esteroles y 1 cera, mostrándose las estructuras de cada uno de ellos.