PLAQUETAS Y ANTICUERPOS ANTIFOSFOLÍPIDOS Iván Palomo Facultad de Ciencias de la Salud Universidad de Talca II Congreso Científico de Estudiantes de Tecnología Médica del Sur Universidad de la Frontera PLAQUETAS Y ANTICUERPOS ANTIFOSFOLÍPIDOS Octubre, 2005 Figuras blanco-negro: libro Hematología: Fisiopatología y Diagnóstico, 2005

Plaquetas

Megacariopoyesis

Remoción fisiológica de plaquetas desde la circulación Médula ósea Trombopoyesis Megacariocitos Sangre Hemostasia (8-10 días) Bazo, Hígado, MO Remoción Macrófagos ? Marcadores de envejecimiento: Serotonina Densidad

PAIgG en plaquetas humanas separadas en gradiente de densidad (n:18) 1200 1000 800 600 400 200 PBD PDI PAD Moléculas IgG/ Plaqueta (Jóvenes) (Envejecidas) PBD vs PAD p<0.01

Expresión de PS, GPIV y P-Selectina en plaquetas humanas de diferente densidad

Recuento de plaquetas y exposición de PS Inyección de estradiol en perros (n:7) Exposición de PS* Recto Plaquetas *, citometría de flujo

Recto plaquetas y potencial de mb mitocondrial Inyección de estradiol en perros (n:13) Recto Plaquetas DIOC, MFI ψm

Remoción fisiológica de plaquetas mecanismo inmune y no inmune FcR Macrófago Scavenger R IgG FS

Estructura plaquetaria ADP ATP Serotonina Calcio P selectina FvW, fibronectina Vitronectina Trombospondina FV, HMWK Fibrinógeno, FXI Proteína S, PAI-I PF4 PDGF, TGF 

Función plaquetaria

Ac Antifosfolípidos

Ac Antifosfolípidos Grupo heterogéneo de anticuerpos IgG, IgM, IgA ELISA de fase sólida (aCL) Anticoagulante Lúpico (AL) Trombosis (venosa y arterial) Abortos espontáneos a repetición Trombocitopenia

CLASIFICACIÓN DEL SAF Primario Secundario Enf.Auntoinmunes LES Lupus probable Otras mesenquimopatías Neoplasias Tumores sólidos Neoplasias hematológicas Inducido por drogas Asociado a infección Variantes del SAF SAF catastrófico Asociado a otros Sínd.microangiopáticos Síndrome de hipoprotrombinemia SAF seronegativo

Antígenos Beta-2 Glicoproteína I (b2GPI) Protrombina (PT) Proteínas del Sistema Proteína C PC, PS, Trombomodulina Anexina-V Kininógeno de alto peso molecular Fosfolípidos aniónicos: FS, CL

b2GPI Patrón de PM b2GPI kDa 326 aa 29 200 97 12 Lis, 1 Arg, 1 His 68 Glicoproteína 5 dominios Patrón de PM b2GPI kDa 200 97 68 50 43 29 12 Lis, 1 Arg, 1 His 326 aa

Ac antiβ2GPI * Ac antiβ2GPI - β2GPI: Baja afinidad en solución Epítopos Ac antiβ2GPI - β2GPI: Baja afinidad en solución Ausencia de CI séricos en SAF β2GPI – Superficie FL: Baja afinidad Aumenta con Ac antiβ2GPI

Protrombina Dominios Gla 72 kDa 579 aa Complejo Protrombinaa

Ac anti-Protrombina (aPT) Fragmento 1.2 A B s-s Epítopos Aumentan unión PT a superficie FL, sin interferir C. Protrombinasa. Inhiben acción de Antitrombina. Interferen acción de la Plasmina. Complejo protrombinasa Acción anticoagulante: Interfire acción C. Protrombinasa

Complejos Ac antiβ2GPI – β2GPI Ac anti-b2GPI (dominio I) b2GPI Reversible Ac anti-b2GPI (dominio II) Irreversible Similar en Ac antiPT - PT

Ac aFL en pacientes con LES 145(5): 336-340

Ac aFL en pacientes con trombosis* y controles aCL 57 25.2 4 4.2 4.8 0.01 (1.4-16.1) aPT 31 13 .7 3 3.2 8.9 0.004 (2.1-38.5) Pacientes (n=226) Controles (n=95) n % n % OR** p* anti-2GPI 14 6.2 2 2.1 3.2 0.2 (0.5-19.5) *, Trombosis Venosa o Arterial **, ajustado por edad y sexo Continua Palomo I, Pereira J, Alarcón M, Vasquez M, Pinochet C, Velez MT, Sandoval J, Icaza G, Pierangeli S. Prevalence and isotype distribution of antiphospholipid antibodies in unselected Chilean patients with venous and arterial thrombosis. Clin Rheumatol. 23(2):129-33, 2004.

Prevalencia y Distribución Isotípica de Anticuerpos aCL, anti-2GPI y aPT en Pacientes con Trombosis* (n=226) (cont.) Cualquier isotipo 57 25.2 14 6.2 31 13.7 IgG 23 10.2 5 2.2 12 5.3 IgM 27 11.9 4 1.8 19 8.4 aCL anti-2GPI aPT n % n % n % IgA 22 9.7 7 3.1 3 1.3 *, Trombosis Venosa o Arterial

Prevalence of Val/Leu247 and Trp/Ser316 polymorphisms of β2GPI among patients with thrombosis and controls. Patients (n:149) Control group (n:160) Odds Ratio p Polymorphism n % Val/Leu247 133 89.3 117 73.1 3.1 (1.6 – 6.0) 0.0003 Trp/Ser316 15 10.1 6 3.8 2.9 (1.1 – 8.6) 0.027 Palomo I, Pereira J, Alarcón A, Vásquez M, Pinochet C, Poblete F, Mendez E, Sandoval J, Vidal R, Pierangeli S. Val/Leu247 and Trp/Ser316 polymorphisms in β2 glycoprotein Ι and their association with thrombosis in unselected Chilean patients. (enviado)

Mecanismos protrombogénicos de los Ac aFL Inhibición de anticoagulantes naturales Sistema PC, AT, IVE Anexina V Inhibición del Sistema Fibrinolítico Monocitos Aumento expresión de FT en monocitos circ. Plaquetas Activación celular Células endoteliales Up regulation de Moléculas de Adhesión Aumento expresión FT Aumento unión de Protrombina

Mecanismos protrombóticos de los Ac aFL CE Ac aFL APC PS PC Plaqueta PT TM AT T TF Anexina A5 β2GPI TFPI tPA PAI-1 Plasmina Plg Xa VIIa Va X EPCR Bárbara Fuentes Forastiero R, Martinuzzo ME. Antigen Specificity and Clinical Relevance of Antiphospholipid Syndrome. Current Rheumatology Reviews, 2005, 1,

Ac Antifosfolípidos y Plaquetas

Unión de Ac aFL a plaquetas Ac aFL se unen a plaquetas en reposo (separ. por filtración en gel) Elución de Ac aFL desde plaquetas de pacientes con LES En presencia de β2GPI y PT, Ac aFL se unen a plaquetas activadas. Unión de Ac aFL IgG a plaquetas incub. con colágeno o cong-desc. Plaquetas con algún grado de activación o envejecidas Células apoptóticas unen β2GPI. Podrían generan epítopos que inducen respuesta del tipo autoinm.

Interacción de los Ac aFL a las plaquetas Región Fab con antígenos específicos de plaquetas. Región Fc (de C. inmunes Ag-aFL) a FcγRII. Región Fab a β2GPI (dímero) unida a apo ER2.

Efecto de los Ac aFL en las plaquetas Mayor expresión de CD63. Mayor liberación de P-selectina (CD62P). Aumento expr. GPIIb-IIIa c/ bajas dosis de TRAP y aFL. Aumento de micropartículas plaquetarias. Aumento de síntesis in vitro de TXA2 Aumento de la agregación plaquetaria (con concentraciones subagregantes de ADP, trombina o colágeno).

F(ab’)2 de Ac aFL aumentan: Efecto de los Ac aFL en las plaquetas (cont) F(ab’)2 de Ac aFL aumentan: Fosforilación de la p38MAPK Fosforilación de fosfolipasa A2 TXB2

Ac aFL y Plaquetas Activación ADP TXA2 ApoE2 CD63 P MAPp38 Kinasa Anti-β2GPI I II III IV V Dímero β2GPI ApoR2 ApoE2 TXA2R P2Y1 P2Y12 P CD62P CD63 GPIIb-IIIa ADP TXA2 MAPp38 Kinasa Activación