1 Calcio Calcio iónico Magnesio Fósforo PTHI 25 Vit D 1,25 D Marcadores F y R Calcio Fósforo Magnesio Sodio Urico Citrato Oxálico Cistina Marcadores R SANGRE ORINA LITIASIS

2 Calcio H+ Fósforo Magnesio H+ Sodio Urico Citrato H+ Oxálico H+ Cistina Marcadores R Clearence Reabs tub fosforo ORINA 2 HS relación ca/cr Reabs tubular fosforo Clearence creat Marcadores R 2ª orina espontanea Relación ca/cr Marcadores R ORINA 24 HS

3 Cl creat 24 hs: cr orina x diu24 c suero x 1440 Cl acido urico Cl de fosforo Cl creat 2 hs: cr orina x diu2 cr suero x 120 Cl corregido: cl creat x 1.73 sup corp I D I M

4 Reabs tub PO4: fosf orina x crea suero x 100 fosf suero x crea orina I D I M

5 1)Medición de calcio total e iónico. 2)Suero o plasma con heparina. Nunca EDTA, citrato, oxalato.

6 Calcio iónico: 1)Factores que afecten el pH de la muestra (contacto con el aire). Al aumentar protones (dism pH) disminuye el calcio unido a albumina y aumenta el iónico. 2)Anticoagulante inadecuado 3)Anticoagulante en exceso (dilución de la muestra) I D I M

7 CALCIO Efecto de albumina sobre calcio total: Calcio correg : calcio total ( 4 – alb)

8 Buena concordancia, pero VI… ademas de 2 mediciones: ca y alb

9 I D I M FOSFORO Y MAGNESIO: 1)Suero 2)Evitar hemólisis PTH Y MARCADORES OSEOS: 1)FREEZER 2)Evitar hemolisis

10 I D I M MARCADORES. EN AYUNAS Y A LA MAÑANA TODO EL METAB FOSFOCALCICO EN AYUNAS!

11 Dificultades en la interpretación clínica del dosaje de PTH por las metodologías actuales

12 I D I M PARATHORMONA

13 Problemas en dosaje PTH Distintos anticuerpos Distintos fragmentos moleculares Distintas cantidades de esos fragmentos. Distintas formas moleculares (NH2-PTH) Tipo de muestra Estabilidad de PTH Variabilidad biológica Dificultad en rango de referencia

14 Este anticuerpo varia y confiere distinta especifidad

15 Aumenta a medida que disminuye el GFR Es producido por la glandula Efectos opuestos a Este fragmento es medido por todos los kits de PTH disponibles

16 “WHOLE” PTH

17 relacion “whole” PTH/ “intact” PTH: < 1

18 J. Clin. Endocrinol. Metab :

¿VENTAJAS WHOLE PTH?

PTH pg/ml x : pM

PTH NEQAS CONTROL DE CALIDAD EXTERNO

PTHI STANDARD DE REFERENCIA INTERNACIONAL IS 95/646

Problemas en dosaje PTH Distintos anticuerpos Distintos fragmentos moleculares Distintas cantidades de esos fragmentos. Distintas formas moleculares (NH2-PTH) Tipo de muestra Estabilidad de PTH Variabilidad biológica Dificultad en rango de referencia

Problemas en dosaje PTH Distintos anticuerpos Distintos fragmentos moleculares Distintas cantidades de esos fragmentos. Distintas formas moleculares (NH2-PTH) Tipo de muestra Estabilidad de PTH Variabilidad biológica Dificultad en rango de referencia

Problemas en dosaje PTH Distintos anticuerpos Distintos fragmentos moleculares Distintas cantidades de esos fragmentos. Distintas formas moleculares (NH2-PTH) Tipo de muestra Estabilidad de PTH Variabilidad biológica Dificultad en rango de referencia

Problemas en dosaje PTH Distintos anticuerpos Distintos fragmentos moleculares Distintas cantidades de esos fragmentos. Distintas formas moleculares (NH2-PTH) Tipo de muestra Estabilidad de PTH Variabilidad biológica Dificultad en rango de referencia

Factores a tener en cuenta para el valor de referencia Tipo de muestra Estado nutricional de vit D Edad Clearence de creat Ingesta calcica BMI ETNIA

I D I M Dosaje de 25D Estado Nutricional 1,25 DI HIDROXI Vit D NO !!!!!!

ETAPA PREANALITICA

Clinical Chemistry 2005:51

ETAPA ANALITICA

-2SD-1SDALTM+1SD+2SD DEQAS 2011 (ng/ml)

Problemas Método Especificidad Sensibilidad Estandarización: necesidad de un st. Internacional y un metodo de referencia Experiencia propia con el ensayo

Métodos para 25OH D COMPETICION PROTEICA HPLC RIA ELISA LC-MS in house.

Métodos para 25(OH)D AUTOMATICOS DIASORIN Quimioluminiscencia (2004) SIEMENS Quimioluminiscencia ABBOTT Quimioluminiscencia ROCHE Electroquimioluminiscencia IDS – ISYS Quimioluminiscencia VITROS Quimioluminiscencia

Listado de trabajos nuevos ensayos 2012/14 Heijboer et al. Clin Chem 58: Ong et al Clin Chim Acta Barake et al, JCEM 97(3) Tahsin et al, Clin Nutr 2012 Won Moon et al Clinical Biochem Farrell et al Clin Chem 58: Van den Ouweland JM et al, J Chrom Chen Y et al, Clin Biochem 2012 Emmen JM et al, Clin Chem Lab Med 2012 Jenssen M et al, Steroids 2012 Farrell et cl Clin Chem Lab Med 2012

Listado de trabajos nuevos ensayos 2012/14 Becker et al, Clin Chem 2012 Bianchi S et al, Clin Biochem 2012 De Koning L et al Clin Chim Acta 2013 Cavallier E et al, Clin Chem Lab Med 2013 Depreter B et al, Clin Chim Acta 2013 Glendenning P et al Clin Biochem 2013 Holmes EW et al, AJCP 2013 Su Z et al, Clin Chim Acta 2014 Farrell C et al, Clin Chem Lab Med 2014 Cavallier E et al, Clin Chim Acta 2014

1) Gran variabilidad entre ensayos 2) Gran variabilidad con respecto a LC/MS in house 3) Gran variabilidad en respuesta a standard internacional SRM ) Linealidad (anticuerpos heterófilos). El corte (20 ng o 30 ng) debería ser ensayo-especifico. Seguimiento en el mismo laboratorio Urgencia en la estandarización.

Fuentes de variación Especificidad: Dos moléculas en circulación (25D3 Y 25D2)

ENSAYOEMPRESA% 25D3%25D2 RIADIASORIN100 LIAISONDIASORIN100 CENTAUROSIEMENS COBAS/ MODULAR ROCHE ARCHITECTABBOTT RIA ctDIASOURCE 100 ELISADIASOURCE ELISAINMUNODIAG NOSTIK

Fuentes de variación Especificidad: Dos moléculas en circulación (D3 Y D2) 24,25 (OH)2 D

D ng/ml 8 ng/ml 4 ng/ml

ENSAYOEMPRESA% 25D3%25D2%24,25 RIADIASORIN100 LIAISONDIASORIN100 CENTAUROSIEMENS COBAS/ MODULAR ROCHE ARCHITECTABBOTT RIA ctDIASOURCE ELISADIASOURCE ELISAINMUNODIAG NOSTIK

Fuentes de variación Especificidad: Dos moléculas en circulación (D3 Y D2) 24,25 (OH)2 C3- epi 25D

ENSAYOEMPRESA% 25D3%25D2%24,25% C3-EPI RIADIASORIN100 - LIAISONDIASORIN CENTAUROSIEMENS COBAS/ MODULAR ROCHE ARCHITECTABBOTT RIA ctDIASOURCE ELISADIASOURCE ELISAINMUNODIAG NOSTIK

Binkley et al, Journal of Clin Densitom 2013

Fuentes de Variación Unión muy importante a DBP: 1) En ensayos automatizados: Dudas con la disociación de la 25D de DBP. 2) Dependencia entre-ensayo de la cc de DBP. Poblaciones “especiales”: embarazo, hemodialisis, UTI

Cavalier E et al, Clin Chim Acta 2014

Las buenas noticias DESARROLLO DE METODO DE REFERENCIA: NIST Y UNIVERSIDAD DE GHENT DESARROLLO DE PROCEDIMIENTOS STANDARES DE REFERENCIA DESARROLLO DE CALIBRADORES DE REFERENCIA. SRM 2972 DESARROLLO DE STANDARDS DE REFERENCIA (SRM 972 Y SRM 972a)

¿Qué puede hacer cada laboratorio? 1)Estricto control interno 2)Participar de un control externo DEQAS / RIQAS / CAP / CEMIC

DEQAS Vitamin D External Quality Assessment Scheme

¿Que devuelve el DEQAS? Media de todos los metodos (ALTM) Media de cada metodo (Diasorin- Siemens- Roche, etc) Desde Abril 2013, valores de las muestras medidos por metodo de referencia internacional (NIST)

DEQAS REPORT 2013

¿valor de referencia o valor de corte?

FACTORES QUE AFECTAN LA SINTESIS CUTANEA DE COLECALCIFEROL SOL MELANINA EDAD LATITUD ESTACION VESTIMENTA PANTALLAS SOLARES

Deficit: menor 20 ng/ml Insuficiencia: ng/ml Suficiencia: mayor de 30