TINCIONES BACTERIANAS ¡Por favor que quede bien gramnegativa señor Gram! Te recomiendo safranina para darle un buen tono http://www.slideboom.com/presentations/86145/TINCIONES_BACTERIANAS

Porque se colorean las bacterias? Visualizarlas mejor Aumentando el contraste entre la bacteria y el medio que las rodea Detalles morfológicos Aumentan un poco su tamaño

Que es un colorante? Compuestos orgánicos (la mayoría) Poseen afinidad específica por los materiales celulares. Según su naturaleza se unen a diferentes componentes celulares Cationicos (+) Comp (-): Ac nuc y polisacáridos ácidos. Aniónicos (-) comp (+): proteínas Azul de metileno Cristal violeta safranina Eosina Fucsina ácida Rojo congo

CLASIFICACION DE LAS TINCIONES Simples: 1 solo colorante Todo se tiñe igual Ejemplos: Tinta china (-), Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol. Diferenciales: Más de 1 colorante Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes. Ejemplos: Gram y Ziehl-Neelsen

PRECOLORACION Fijación Mordiente Coagulación del plasma Calor Sustancias qcas (formaldehido, ácidos y alcoholes) Mordiente Sustancias que se combinan con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora después de esto el colorante podrá fijarse al constituyente. Ejemplo: Acido tánico, lugol.

COLORACION DE GRAM I Hans Christian Gram 1884 Descubrimiento accidental Biopsia de tejido pulmonar Algunas bacterias retenían el colorante después del lavado y otras no Grampositivas Gramnegativas

¿QUE SE NECESITA? I Colorantes Cristal Violeta Lugol Alcohol-Cetona. Safranina.  Otros                  Charola de tinción. Asa bacteriológica. Frasco lavador. Lámina portaobjetos  Muestra bacteriana Sólida (agar) Líquida (caldo) Especímen clínico.  

¿COMO SE HACE? I 1. Extensión

I ¿COMO SE HACE? 2. Coloración 2.1 Violeta de Genciana 1 min

I ¿COMO SE HACE? 2. Coloración 2.2 Lugol de Gram 1 min

¿COMO SE HACE? I 2. Coloración (Etanol al 75 % y acetona al 95 %) 2.3 Alcohol Acetona (Decoloración) (Etanol al 75 % y acetona al 95 %) 15 - 30 seg

I ¿COMO SE HACE? 2. Coloración 2.4 Safranina 30 seg

I ¿COMO SE HACE? 3. Secado

I ¿COMO SE HACE? 4. Observación 4.1 Aplicar aceite de inmersión

¿COMO SE HACE? I 4. Observación 4.2 M.O con objetivo de 100x Gramnegativas Grampositivas

II-P1 COLORACION DE GRAM Violeta Claro Safranina Violeta

COLORACION DE ZIELH NEELSEN Franz Ziehl (bacteriólogo) y Friedrich Neelsen (patólogo). Tinción diferencial Fundamento: Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) de cadena larga (50 a 90 átomos de C) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido

VARIANTES Clásica Variante de Kinyoun En caliente Para Micobacterias En frío Para Actinomyces y Nocardia

TECNICA Realizar frotis Fijar Fucsina-fenicada 5 minutos Lavar Emisión de vapores (no hierva) Lavar Decolorar con alcohol-ácido (2 min o hasta decolración total) Aplicar azul de metileno (1 minuto).

CONSULTA Tinción negativa Tinción para esporas Tinción de Loeffler Rojo Congo