Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas

Presentación del tema: "Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas"— Transcripción de la presentación:

1 Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas

2 Enlace peptídico R1R2

3 Secuencia: AlaGluGlyLys o AEGK

4 COO- COO- NH2 NH2 NH2 COO-

5 Análisis químico Composición? Detección? Secuencia?
Reacciones del enlace peptídico Reacciones del grupo amino terminal Reacciones del grupo carboxilo terminal

6 Reacciones del enlace peptídico y de detección proteica
Hidrólisis ácida (ClH 6M a 100 C, 24hs). Reacción de Biuret ( SO4Cu/tartrato alcalino 540nm). Baja sensibilidad. Reacción de Lowry et al. (Reactivo de Folin-Ciocalteau = mezcla de óxidos de tungsteno y molibdeno) nm Coomassie Brillant Blue Plata

7 Reacciones del grupo amino (terminal)
Ninhidrina (570 nm) Pro a 440nm Fluorescamina (producto fluorescente). Alta sensibilidad 1-Fluoro-2,4 dinitrobenceno(FDNB, reactivo de Sanger) Cloruro de dansilo o-ftalaldehído (en sn con mercaptoetanol, producto fluorescente). Alta sensibilidad

8 Reacciones del grupo Carboxilo
Hidrazina (H2NNH2) Carboxipeptidasa

9 Secuenciación Purificación de la proteína o péptido
Ruptura de los puentes disulfuro Determinación de los extremos amino-terminales y carboxilo-terminales Corte específico de la secuencia principal en fragmentos menores, al menos en dos formas distintas Purificación de cada segmento y secuenciación Determinación de la secuencia total

10 2 Ruptura de –S-S-

11 DTNB ( ácido ditio-bis-nitrobenzoico)
nitrotiobenzoato

12 3 Determinación de extremos

13 Producto púrpura

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16 4 Cortes y producción de fragmentos
Métodos enzimáticos

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18 4 Cortes y producción de fragmentos
Métodos químicos

19 5 Secuenciación de fragmentos

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